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液相色谱仪HPLC-输液泵的维护和使用注意事项+影响因素及解决方法 HPLC-输液泵的维护和使用注意事项 一、为了延长HPLC液相泵的使用寿命和维持其输液的稳定性请按照以下注意事项操作：1、防止任何固体微粒进入HPLC液相泵体，因为尘埃或其它任何杂质都会磨损HPLC液相柱塞、HPLC密封环、HPLC液相缸体和HPLC液相单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是过滤，可采用Millipore 滤膜（0.2um 或 05um） 等滤器。泵的入口都应该连接砂滤棒（或片），输液泵的滤器应经常更换。2、流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是HPLC停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含有缓冲液的流动相留在HPLC液相泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静止，就可能析出盐的微小晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏HPLC密封环和HPLC柱塞等。因此，必须HPLC泵入纯水充分清洗后，再换成适合于HPLC色谱柱保存和有利于HPLC泵维护的溶剂（对于反相键合固定相，可以是甲醇或甲醇和水）。3、HPLC泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相用完，否则HPLC空泵运转也磨损HPLC柱塞、HPLC密封环或HPLC缸体最终产生漏液。4、HPLC输液泵的工作压力不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。5、流动相应先脱气，以免在HPLC泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡HPLC泵就无法工作。二、如果HPLC输液泵产生故障，需查明原因，采取相应的措施排除故障：1、没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是HPLC泵内有大量的气体，这时可打开泄压阀，使HPLC泵在较大的流量（5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml的注射器在泵出口处帮助抽出气体。另一个原因可能是HPLC密封环磨损，需更换。2、HPLC压力的流量不稳。原因可能是气泡，需要排除，或者是单向阀内有异物，可以卸下HPLC单向阀，浸入丙酮内，进行超声清洗。有时有可能是砂滤棒内有气泡或被盐的微小晶体粒或滋生的微生物部分堵塞，这时卸下砂滤棒浸入流动相内，超声除气泡，或将砂滤棒（片）浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内迅速除去微生物或将盐溶解，再立即清洗。3、HPLC压力过高的原因，是管路被堵塞，需要清除或清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时可逐段进行。 HPLC-液相色谱仪检定中常见的影响因素及解决方法: 1.气泡由于HPLC系统中气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。造成上述现象的主要原因有三条：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡；二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净；三是在注入样品时不注意混入了空气。为了避免这类问题的出现，HPLC实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理；在HPLC系统开始工作前，可以用注射器连接恒流泵的排空阀，抽入流动相，将流路中的空气驱赶干净；在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。2.柱温在操作HPLC时，色谱柱是在室温环境下工作的。大多数的工作环境温度是不断变化的，温度的差别就会引起较复杂的问题。温度的影响在所有的色谱分析方式中都是存在的，HPLC方法中的洗脱方式受温度的影响。等度洗脱时温度会影响保留时间，当温度升高时所有的色谱峰都前移了，等度洗脱时一般温度每升高１℃，保留时间会缩短（1~3）％。温度变化对梯度洗脱和等度洗脱的影响趋势是一样的。温度变化对梯度洗脱的影响要小于对等度洗脱的影响。即便如此，若梯度洗脱时不控制温度的话，保留值一般也会有较大的变化。温度变化还可能引起选择性显著变化。正如柱子不能完全平衡将导致保留时间的重现性差一样，柱温不平衡也会导致不理想的后果，这个问题在峰宽上的影响尤其明显。当温度变化时除了选择性和保留时间的变化之外，峰宽也会发生变化。升高温度通常会使理论塔板数升高，峰宽变窄，由于峰面积不变，峰越窄就会越高，因此升高温度可以达到更小的检测限。柱子里的温度变化也会影响峰形。当流动相和柱子之间的温差增大时，由温度不平衡而导致的峰变形就会加剧。 为了获得一致的结果我们必须要控制柱温，使用柱温箱是最好的办法。如果没有柱温箱，最有效的办法就是将色谱柱隔绝在一个温度波动最小的地方。3. 色谱柱污染色谱柱污染会引起保留时间漂移。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可能是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。样品中如果存在HPLC色谱柱上保留很强的组分，就可能使