药物微生物鉴定实例.ppt

;标准化操作;标准化操作;标准化操作;标准化操作;标准化操作;验证实验的几个问题;微生物限度检查法验证实验要点;首先应是合格的样品。;微生物限度检查样品;抽样量和检验量分别单列一项。 抽样量 一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装）的3倍。 检验量 指供试品一次检验的用量。一般为10g或10ml；化学药膜剂为100cm2；贵重或微量包装的药品可酌减（不得少于3g）。检查沙门菌的供试品其检验量改为10g或10ml。 验证实验按检验量执行。 ;微生物限度检查样品; 供试液的制备 制备供试液所用的乳化剂、分散剂、中和剂及其用量应验证，在该检验条件无抗菌作用。 7类供试品供试液的制备，其中增订：;非水溶性供试品 ①司盘80、单硬脂酸甘油酯、聚山梨酯80 ②供试品10g，20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠，必要时再加适量十四烷酸异丙酯，充分振摇，使供试品溶解。然后加 45℃100ml pH7.0蛋白胨氯化钠缓冲液，振摇5-10分钟，萃取，待油水分层后，取水层作为1：10供试液。; 非水溶性膜剂供试品 化学药膜剂取100cm2，剪碎，加100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，浸泡，振摇，作供试液。一部中药膜剂取50 cm2，剪碎，加适量的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液（50或100ml）浸泡，振摇，以供试品浸液为供试液。（SOP 2000版规定:中药膜剂取30-50cm2 ，剪碎，加水100ml）。; 肠溶及结肠溶制剂 供试品10g，加100ml pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（肠溶制剂）或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液（结肠制剂）,于45℃水浴振摇，使溶解。 ; 气雾剂、喷雾剂供试品 取规定量供试品，置冷冻室冷冻1h，取出，迅速消毒供试品开启部位周围，用无菌钢锥钻一小孔，放置室温，并轻轻转动容器，使抛射剂全部抛出。以无菌注射器吸出全部药液，按标示量加稀释剂至足量（若含非水溶性成份，加适量无菌聚山梨酯-80液），使匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1∶10的供试液。;具抑菌活性的供试品 供试品接种至较大量的培养基中。1ml供试液可等量分注多个平皿；控制菌检查，可加大增菌培养基的用量，或采用薄膜过滤法。 离心集菌法 薄膜过滤法 ;微生物限度检查样品前处理;微生物限度检查法??证; 在建立供试品的细菌、霉菌和酵母菌计数方法或原法的检验条件有改变可能影响检验结果的准确性，应对检查法的可靠性进行验证。验证时做规定菌的回收试验，以判断供试品是否具有抗菌活性的实验方法。 ;验证用菌株 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念株菌、黑曲霉。 菌液制备（同无菌检查法）。 取培养物用无菌氯化钠溶液稀释成1ml含50～100cfu的菌液。 ;验证方法 试验组 取规定量最低稀释级的供试液，加入50～100cfu的菌液，按平板菌落计数方法测定其菌数或薄膜过滤计数。 菌液组 测定加入的试验菌液的菌数。 供试品对照组 测定供试品稀释液（本底）的菌数。 稀释剂对照组 取稀释液加入50～100cfu的菌液，按供试品组供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。 验证试验应独立平行进行3次，分别计算各次 试验菌的回收率。 ; 回收率计算 试验组的菌回收率=[（试验组平均菌落数–供试品对照组平均菌落数）/菌液组平均菌落数 ]×100% 稀释剂对照组的菌回收率=[（稀释剂对照组的平均 菌落数/菌液组的平均菌落数）]×100% ;结果判断 稀释剂对照组的菌回收率应大于70%。若试验组的菌回收率均大于70%，符合验证试验，可按此方法测定细菌、霉菌及酵母菌数；若任一次平行试验中供试品组的菌回收率均小于70%，不符合验证试验，应建立新的检验方法，并重新验证。 验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同 时进行。 ;回收率测定实验;回收率测定实验;回收率测定实验;回收率测定实验; 在建立供试品的控制菌检查法或原法的检验条件有改变可能影响检验结果的准确性，应对检查法的可靠性进行验证。验证时做规定菌的回收试验，以判断供试品是否具有抗菌活性的实验方法。;验证用菌株 ： 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌。 菌液制备（同前）： 用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1ml含10-100cfu。 ;验证方法 ①试验组：取规定量供试液及10～100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。当采用薄膜过滤法时，试验菌应加在