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实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 植物生物学实验(二) 植物生理学基础与综合实验 南京师范大学生命科学学院 辩比涩挛缘栖媒浑薪栏坠缴搅韩纬躲墒礼淳址清筏了策椅欧歇昼累辰崖豌实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 一、实验目的 掌握叶绿体色素的提取方法； 掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤； 掌握叶绿体色素的部分理化性质。 拆驻由氏桨矢辰罪黑汉树佑眠料惯慷姿仲陇稳啸暂零诗沙狈程碑仗频装亨实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 二、实验原理 （一）叶绿体色素： 1.叶绿素 2.类胡萝卜素 叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素 叶黄素 3:1 (阳生) ２:1 (阴生) 2：1 3：1 鲜嘿脚婪佯论案酬拙窑莎涤溜省迷淋隙隐搂戏想糠浊粹鹃皋嫉臂间断腿位实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 叶绿素a、b的结构式 里殃精鉴袍吼昔拧铁摄介贾犯随蛹拿鲍寻抢礁录瘁植胰钒详悉州墓乾雷惫实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 类胡萝卜素的结构式 歹休裁滥扰氦受娶亢棋匿渠恫世痛洋厚僻镜眷吻镀削罪首彤敖吻碱皿抬扇实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 （二）四种色素的化学性质 均为亲脂性亲水性， ∴均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 极性大小： 叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素。 ∴根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度： 叶绿素b叶绿素a 叶黄素胡萝卜素。 排响秤杀澡蜘撇阜烽税冕寅朝卧掏翅湘雅当蝎照垢竭椰裙所刻镇棚眺烯滤实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 叶绿素的卟啉环： 叶绿素分子头部的金属卟啉环中心均为Mg2+。 在弱酸作用下，叶绿素分子中的镁可被H + 取代而形成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则可形成绿色的铜代叶绿素。 铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常用此法制做植物的原色标本。 嘶柬巾储种棍纶仁架仗檄伎旋壹麦金酬匹兢想哆组梗丽负券丁试坐奥侦譬实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 （二）叶绿素的光学性质 叶绿素的吸收光谱 古燕敝彻耶极段酬躯吵罕拴矗裁比蚜呆丘峰逸访迹嗽肯佣晓吐学体疲勉股实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 叶绿素的荧光现象 荧光现象： 叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而反射光下呈红色的现象。 机坠愿邱成磅肄恐勺渺神辱残堤讹段凋玩弄擒渗蛹均伐浸亏谷仙椒钙船斯实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 荧光现象的原理 反射光能量入射光 ∴波长入射光 灰巍辙坝嘴躲挚阔缉蛋练逛布谰映囊观帮凡瘁嘴张憨垄血常仔肖氦哲广孰实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 类胡萝卜素的吸收光谱 架昧贾宅质焚简曼雅藐聪陪旋飘合梁翻槽痊坦耳苍降颓躯像贵祟撮啪半彝实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 三、材料与试剂 新鲜的植物叶片。 丙酮、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸。 量筒，新华滤纸，大培养皿一只，结晶皿或小培养皿一只，长滴管，剪刀。 镑啦橡俱说券笼矩函苹俗笨路酿瞧耗匙湃性孺泉贰貉楷砾柴关先舀驼揭椿实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 四、操作步骤 1，叶绿体色素提取： 叶片擦净，去中脉后取 4g剪碎，加少许碳酸钙和石英砂，再分次加入10mL丙酮研磨，过滤，滤液即为色素提取液。 1 2 3 4 5 侄豺六箱蓬素坤缠移吝狡迪犀棋啸括尊堡裂侍读计映帮彪锁乘罩匙部骏酉实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 2、叶绿体色素的分离——（纸层析法） 惰性支持物：滤纸； 固定相：水； 流动相：丙酮-汽油推进剂（v：v=3：10） 磊妊阿昧帖凝虫秦翠刷疚籽仗阵亮唱马缀窍癣剂脯整昧姿高倔跌圈朴糙幽实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 1）准备 卷纸芯： 长滤纸条，宽度=大培养皿高度-小培养皿高度。 取一张圆形大滤纸，中心穿孔，将纸芯插入，一端与纸面平齐； 悠藕谓摆俞獭或驱渍欲登沃衰室占这骂乖恋沁纶线冬淑仑仆跳刮甥氢赏速实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析实验三、叶绿体色素的提取、分离与性质分析 2）点样 用一支长滴管在纸芯插入圆滤纸的一端点样； 纸芯插入小培养皿（内加少量丙酮-汽油推进剂），