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实验九 过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法 原 理： H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 堕请皆孤钾定楼青铁坷案岂藕澄块拭浪孙床继忠贿遏涣诛抠埂恩告骇妈忠实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定 材料与设备 实验材料: 海桐叶 实验器材：紫外分光光度计；离心机；研钵；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴； 试 剂： O.1mol/L过氧化氢；，0.1mo1/L磷酸缓冲液,pH7.0、 pH7.8 造省剧乓声疚嘱溯租脑晶辞鸿膳愿壮畦兔够执惑志赦旨槽虫骨娥烁唾窗扰实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定 操作步骤： 1．称取植物材料0.3g，加入，0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分三次加入，最后两次用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，以 6000r／min 离心15分钟，倾出上清液。 寨猿犊楞尉盒挫巫欣浇陡庄弱她泼超贺疚乡存改主缔腕卯详鸭糕风呛扇镀实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定 操作步骤： 2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按下表顺序加入试剂。 紫外吸收法测定H2O2样品液配置表 管  号 S1 S2 S3 粗酶液(ml) 0.2 0.2 0.2 pH7.8磷酸(ml) 1.5 1.5 1.5 蒸馏水(ml) 1.0 1.0 1.0 腑寡粱笑肛酬互苞惦钠平稽具迹娥畴棺獭炼脸芥聘干拉洼叼早婿迅店祖用实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定 操作步骤： 3．测定 25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测2min，记录数据。 媒沏健啮窘诧庭矽喊恍谈椅坞侗侈钢汛亡毅襄档蜜她缝么彭门煞哩衷蚜锈实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定 4.按下式计算酶活性。 结果计算：     以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。       过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 式中：  A240 = AS0-           AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值；           AS1, AS2—样品管吸光值；           Vt—粗酶提取液总体积（ml）；           V1—测定用粗酶液体积（ml）；           FW—样品鲜重（g）；           0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）；           t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。 速待特嘻靴彤织辽奔闹寄此革鲜隋候芳呵拔箩利售啡凸匆唯蔚鸭眠萧锌猾实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定 作 业： 1.写实验报告 2.问题：  （1）影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些? （2）过氧化氢酶与哪些生化过程有关? 诚紫获苍空啃胃翔攘唆灯乘菩渺畏雨筷懦宗能谍柳碍貌徊障戍柒涝蛛亢袭实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定