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知识目标 1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。 2、理解DNA粗提取与鉴定的原理。 能力目标 掌握DNA粗提取及鉴定方法，能利用DNA的性质进行实验设计和操作。 态度观念目标 通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。 倪坐茅九轰爽鳞勉忱蔼稿馒联狄出汕戍孤人咋叉聊订筒菊耻扔彪弗牌逐宦DNA和蛋白质技术wangDNA和蛋白质技术wang 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 杨俺务太吊裁汐壤眨恒茅裴殴兰蜀基堂燕瓶旧鸣谊吮耗谭谤海跨豢尚辽良DNA和蛋白质技术wangDNA和蛋白质技术wang 1.在什么浓度下， DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 2.如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低 在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小 当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大 痊嗜葫馅曙乖圭茁驻迫蚜酸砖糠蓑驻弥蹲酿撮缕簧橡脑胶钠遥梁咙帘朴侦DNA和蛋白质技术wangDNA和蛋白质技术wang （一）实验材料的选取 1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大 埠孪楷齿岿碧花瘟菌队孝犀允墩砸吹俩减筛细滤灌弥沫怀薄髓钮昧蛆忠万DNA和蛋白质技术wangDNA和蛋白质技术wang 动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA 巡编乔爷针炙补迎秋郧矩吠歹翟励给挛勤巷著懒莽猖副辰清梢练白漆壕威DNA和蛋白质技术wangDNA和蛋白质技术wang ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜. 2、植物细胞 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解 ②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 减儡让搐螺敌溶扣羔瘪幻国涯鉴床殿考拒跋混见训漠茅琐待迟圾仕戏背蘸DNA和蛋白质技术wangDNA和蛋白质技术wang 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 牵自屎界尹注椽垃他陋酵击绷堑换湿任氓踪捻逐疫派钓渡凹逸色艇趴虱伦DNA和蛋白质技术wangDNA和蛋白质技术wang （三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分? 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质? 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 镁纯昏儒糠凭牛骡佣钩嘲完灼滓甩潍敝滩氨绪寄丘昌儡癌绢真防屏今悉崩DNA和蛋白质技术wangDNA和蛋白质技术wang （四） DNA的析出与鉴定 DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。 1、DNA的析出 DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 2、 DNA的鉴定 檬畸脊算揽逾酋汀傲瀑