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高效液相色谱法同时测定染发剂中13种染料 【摘要】目的: 建立染发剂中13种染料的HPLC测定方法。方法: 样品经乙醇- 水超声提取后, 过滤后进样检测。以磷酸盐缓冲液- 乙腈为流动相梯度洗脱, 流速1 m l/m in, 检测波长为203 nm。 【关键词】 染发剂；染料；高效液相色谱分析 【高效液相色谱法】高效液相色谱法【1】是20世纪70年代发展起来的一项高效、快速的分离分析技术。液相色谱是指流动相为液体的色谱技术。在经典的色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。这种柱色谱技术称作高效液相色谱法。它可以用来进行液固吸附、液液分配、离子交换和空间排阻色谱分析，应用非常广泛。主要特点有高压、高速、高效和高灵敏度。对于高沸点，热稳定性差，相对分子质量大（大于400以上）的有机物原则上都可用高效液相色谱法来进行分离、分析。 【分离原理】1.液—液分配色谱法。流动相与固定相都是液体。试样溶于流动相后，在色谱柱内经过分界面进入固定相中，由于试样组成在固定相和流动相之间的相对溶解度存在差异，因而溶质在两相间进行分配。组分分离的顺序决定于分配系数的大小，分配系数大的组分保留值大，但流动相的种类对分配系数有较大的影响。2.液—固色谱法。流动相为液体，固定相为吸附剂。各组分根据物质吸附作用不同来进行分离。3.离子对色谱法是将一种或多种与溶质分子电荷相反的离子加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。4.离子交换色谱法是基于离子交换树脂上可解离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，根据这些离子对交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。 【染发剂】染发作为美容方式之一, 近年来消费人群不断扩大。城市中青少年彩色染发者逐年增多, 同时中老年人群中染发者比例也呈上升趋势.【2】染发剂是一类含有染料的化妆品。目前染发剂的分类方式有多种, 根据其染色后的牢固程度，染发剂可分为暂时性、半永久性和永久性三类。其中永久性染发剂染发原料又可分为氧化染料、还原染料和仿天然黑素染料。其中氧化型染发剂最受欢迎, 占到市场份额的80%.【3】氧化染料是合成染料中最早用于毛发染色的，也是目前应用最广泛的持久性染发剂原料。氧化型染发剂以其染色效果好、色调变化宽、维持时间长等诸多优点而成为最受欢迎的染发剂。但氧化型染发剂主要由氧化型染料和氧化剂组成。染发剂中的染料成分多属于芳香胺类化合物，芳香胺中有很多物质具有致癌性，所以染发剂的安全性一直受到人们的极大关注。由染发剂引起的过敏反应非常普遍，长期使用还可能致畸、致突变、致癌及引起内分泌效应等。根据卫生部监督司资料, 目前我国批准生产的染发剂以每年数十种的速度上升【4】 。因此, 加强对染发剂的卫生管理和日常监督非常必要。 为了加强对该类产品中氧化型染料的监管，中华人民共和国卫生部颁布的《化妆品卫生规范》(2007年版)明确规定了93种暂时允许使用的染发剂，并规定了限量要求。【5】通过试验, 本实验建立了以磷酸盐缓冲液- 乙腈为流动相, 用高效液相色谱法测定染发剂中13种染料( 包括1 种禁用染料)的方法, 并用于实际样品的测定, 该方法操作简便、快速、准确、重复性好。 【材料与方法】 1.仪器与试剂 W ate rs2695高效液相色谱仪, 色谱工作站, W a ters2996二极管阵列检测器( PDA ), 超声波清洗器, 水浴锅, 0. 45μ m 滤膜。 乙腈(色谱纯); KH 2 PO4 ( AR); Na2HPO4 ( AR ); 庚烷磺酸钠( AR) ; 亚硫酸钠( AR) ; 乙醇( AR) ; 高纯水。 p- 苯二胺( p - phenylened iam ine )、p - 氨基苯酚( p -am inopheno1) 、氢醌( p- hydroquinone) 、甲苯- 2, 5- 二胺硫酸盐( 2, 5- diam inoto luene sulfate )、m - 氨基苯酚( m - am inophe??no1)、4- 氨基间甲酚( 4- am ino- m - creso l)、o- 苯二胺( ophenylened iam ine) 、间苯二酚( m - d ihydroxybenzene)、4- 甲氨基苯酚硫酸盐( 4- me thy lam inopheno l sulfa te)、N, N- 二甲基对苯二胺( N, N- diethy l- p- pheny lened iam ine) 、5- 氨基邻甲酚( 5- am ino- o- creso l)、6- 氨基间甲酚( 6- am ino- m - cre??so l)、对