络脉舒通预处理对再灌注损伤心肌的影响.docVIP

目的 观察络脉舒通对兔急性心肌梗死（AMI）再灌注损伤心肌的保护作用。方法 24只新西兰大白兔随机分为络脉舒通组、假手术组和对照组，每组8只。脉舒通组采用结扎冠状动脉的方法制备AMI再灌注模型；假手术组完成全部手术操作，只穿线不结扎冠状动脉。脉舒通组制模前每天灌药1次(1.5 g·kg-1·d-1)，连续3 d，术前2 h再灌药1次；假手术组和对照组均灌胃同等量生理盐水。观察各组血流动力学改变，检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和一氧化氮合酶（NOS）的变化，测量心肌梗死面积。结果 （1）络脉舒通组缺血再灌注后2 h左室收缩压（LVSP）和左心室内压最大收缩和舒张变化速率（±dp/dtmax）较对照组均显著升高(P＜0.05)；LVEDP则显著下降(P＜0.05)。（2）络脉舒通组心肌梗死面积与对照组相比显著缩小(P＜0.05)。（3）对照组MDA含量比假手术组显著增高(P＜0.05)，而SOD和NOS活性均显著降低(P＜0.05)；络脉舒通组MDA含量显著降低(P＜0.05)，SOD和NOS活性均显著增高(P＜0.05)。结论 络脉舒通通过清除氧自由基，减轻心肌再灌注损伤，获得较好的心脏保护作用。 【关键词】 络脉舒通 心肌梗死 缺血再灌注 兔 　　经皮冠状动脉介入及溶栓治疗已成为急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）最有效的再灌注治疗方法，使因血栓形成而闭塞的冠状动脉及时开通，实现受损心肌组织有效再灌注。Jennings等〔1〕研究发现再灌注后心肌损伤反而加重，甚至发生不可逆的损伤。有研究发现〔2〕中医治疗可有效的减轻缺血再灌注损伤，络脉舒通是在中医络病理论指导下研制的通络方剂。本研究以新西兰大白兔为对象，通过结扎冠状动脉建立在体急性心肌梗死再灌注损伤动物模型，探讨短期应用络脉舒通对再灌注心肌的保护作用及其机理。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　3～4月龄健康雄性新西兰大白兔24只（由山东省农业科学院提供），标准饮食饲养，体重2～2.5 kg。 　　1.2 药品与试剂 　　络脉舒通由山东中医药大学馈赠，丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒购自南京建成生物工程研究所，Evens蓝（Sigma公司），氯化三苯基四氮唑（上海国药集团）。 　　1.3 模型制备 　　耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠(1 ml/kg)麻醉，沿胸骨左缘剪断第3、4肋骨，暴露心脏，剪开心包。5号缝合线在距左冠状动脉前降支起始部2 mm处穿过。用套管套线后以止血钳夹闭2 h，结扎线远端左室前壁及心尖部颜色变暗，波动减弱，ECG中ST段弓背上抬大于0.2 mV，T波高尖，表明前降支完全结扎。2 h松解结扎线，再灌注2 h，以ST段下降≥1/2，心肌颜色恢复标志再灌注成功。分离左侧颈总动脉，将心导管经颈总动脉插入左心室，导管与压力传感器相通，信号输入MPA150型16道生物信号分析系统及微机系统，分别于缺血前、缺血后2 h、再灌注后2 h测量左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大变化速率(±dp/dtmax)。所有操作在室温30℃左右进行。将新西兰大白兔随机分为络脉舒通组、对照组和假手术组，每组各8只。假手术组完成全部手术操作，只穿线不结扎冠状动脉。络脉舒通组（1.5 g·kg-1·d-1）制模前每天灌药1次，连续灌药3 d，术前2 h再灌药1次。对照组及假手术组均灌胃同等量生理盐水。 　　1.4 检测指标 　　再灌注后2 h抽取静脉血2 ml，3 000 r/min离心15 min，提取上清液，检测乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性。实验结束时取梗死区心肌组织0.1 g制成10%的组织匀浆，应用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定心肌MDA含量，应用催化LArg法测定NOS活力，应用黄嘌呤氧化酶比色法测定心肌SOD活性。 　　1.5 心肌梗死范围测量 　　再灌注2 h后再次阻断冠状动脉血流，注射20 ml 20%Evans 蓝进入左心室进行心肌染色，以区分缺血(无蓝色)和非缺血组织(蓝色)。迅速取出心脏将左室心肌垂直于纵轴切成约2 mm的薄片，将心肌薄片以滤纸吸干，结果非缺血区心肌呈蓝色，缺血区不显色，将整个心肌切片置于1%TTC磷酸缓冲液(pH=7.4)内，37℃孵箱中孵育15 min，梗死区心肌呈灰白色，非梗死区心肌呈深红色，采用图像分析仪测定心肌梗死面积（Infarction area,I）及心室面积（Left ventricular area,LV）,并计算两者比值（I/LV），估测梗死心肌范围。 　　1.6 统计学分析 　　应用SPSS11.0统计学软件进行处理。资料以x±s表示，同组间比较用配对t检验，多组