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牛初乳喂养试验大鼠生长的对比观察 学院：生物科学与工程学院 专业：生物技术 班级：091 学号 学生名字：谭亚林 指导老师：石淳 时间：2011年10月2日 实验名称:牛初乳喂养试验大鼠生长的对比观察 一、实验目的： 1.了解牛初乳的作用； 2.了解奶牛初乳具有改善物质代谢、平衡血糖、调节血脂等保健功效； 3.了解牛初乳对糖尿病的辅助治疗效果； 4.掌握牛初乳发挥降糖功效的主要原因之一； 5.比较IGF- I各种情况对大白鼠的治疗效果。 二、实验原理： 母牛产犊后3天内的乳汁与普通牛乳明显不同，称之为牛初乳。牛初乳蛋白质含量较高，而脂肪和糖含量较低。20世纪50年代以来，由于生理学、生物化学、医学以及分子生物学的发展，发现牛初乳中不仅含有丰富的营养物质，而且含有大量的免疫因子和生长因子，如免疫球蛋白、乳铁蛋白、溶菌酶、类胰岛素生长因子、表皮生长因子等，经科学实验证明具有免疫调节、改善胃肠道、促进生长发育、改善衰老症状、抑制多种病菌等一系列生理活性功能，被誉为“21世纪的保健食品”。探讨牛初乳类胰岛素生长因子- I( IGF- I) 对大鼠高血糖的治疗作用及其机理。方法: 运用链脲佐菌素( STZ) 建立糖尿病大鼠模型后, 给予模型大鼠一定剂量的IGF- I, 口服组连续30 d, 腹腔注射组连续15 d; 各组每隔5 d 测定血糖值, 并于0 d、15 d、停药15 d 测定血清胰岛素、血清生长激素和血清游离IGF- I; 实验结束后,取各组大鼠的胰腺分别进行病理切片观察以及免疫组织的化学分析。 三、实验器材与材料： 实验器材：饲养槽、饲养架、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、手套、镊子等等； 实验材料：试验品系大鼠( 雄性)、牛初乳IGF- I 分离物； 实验试剂：血清葡萄糖测定试剂盒、血清胰岛素、血清生长激素和血清IGF- I 放射免疫测定试剂盒、 链脲佐菌素、免疫组织化学用胰岛素一抗和即用型二抗染色试剂盒。 四、实验方法与步骤： （一）动物分组及实验方案 选健康雄性试验大鼠, 体重160～180 g, 随机分为4 组( 正常组、糖尿病对照组、口服组、腹腔注射组) , 每组12 只, 适应性饲养3 d 后, 除正常组外, 其余组禁食12 h 后, 每只空腹腹腔注射10mg/mL 链脲佐菌素( STZ) 溶液。STZ 溶液用pH4.2、0.01 mol/L 柠檬酸- 柠檬酸钠缓冲液在冰浴中配制, 注射剂量为55 mg/kg[7～8]。自由饮食, 待稳定6 d 后, 尾静脉取血测血糖, 选取血糖值大于16.7mmol/L 的大鼠为糖尿病模型。将分离冻干的IGF- I 分离物溶于灭菌生理盐水中, 用0.22 μm 滤膜过滤除菌, 口服组每天灌胃15 μg IGF- I/kg, 连续30 d; 腹腔注射组每天注射10 μg IGF- I/kg, 连续15 d; 正常对照组及糖尿病对照组每天灌胃灭菌生理盐水5 mL/kg, 连续30 d。 （二）检测指标及方法 各组每隔5 d 测定血糖值, 每隔15 d 测定血清胰岛素、生长激素和IGF- I 值; 给药结束后15 d, 继续监测各项指标; 实验结束后, 取各组大鼠的胰腺分别做病理切片以及胰岛素的免疫组织化学染色。血糖采用葡萄糖氧化酶法测定, 血清胰岛素、生长激素和IGF- I 均采用放射免疫法测定, 且按照试剂盒操作说明进行; 胰腺组织切片采用Mallory-Azan 染色法( 苯胺兰- 桔黄G- 偶氮卡红G)染色, 光镜下观察胰岛β细胞形态[9]; 胰腺各项免疫组化分析参照常规程序和试剂盒说明操作, 显微镜下观察[10]。 （三）数据统计方法 采用方差分析ANOVA 过程, 指定效应均值差异的两两配对T 检验。 （四）数据记录 表1 口服和腹腔注射IGF- I 后的血糖变化( n=8, x ±SD) (mmol/L) 0d 5d 10d 15d 20d 25d 30d 停药15d 糖尿病 对照组 口服组 腹 腔 注射组 表2 IGF- I 治疗后各组大鼠血清胰岛素的变化( n=8, x±SD) ( μIU/mL) 0d 15d 30d 停药15d 正常对照组 糖尿病对照组 口服组 腹腔注射组 表3 IGF- I 治疗后各组大鼠血清生长激素的变化( n=8, x