超声辅助酶法去抗原处理猪异种骨的实验研究.pdfVIP

重庆医学2015年 11月第44卷第 32期 4563 · 经验交流 · doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2015．32．034 超声辅助酶法去抗原处理猪异种骨的实验研究 田家亮，简月奎 ，李建扬 (贵州省人 民医院骨科 ，贵阳 550001) [摘要] 目的 采用超声辅助酶法去抗原处理异种骨，期望获得具有免疫原性低、具有 良好生物力学性能的理想骨移植材 料。方法 将猪异种骨用超临界C0z脱脂、深低温冷冻处理后分为3组，分别采用超声波辅助胰蛋 白酶法去抗原 (A组)、单纯采 用超声波法(B组)或胰蛋白酶法(C组)处理异种骨，并取新鲜骨为D组。观察和比较各组的骨材料大体标本和切片、抗原性、材 料的生物力学特性 。结果 超声辅助酶法去抗原处理并种骨速度快，经处理后 的猪异种骨材料去抗原更彻底 ，免疫原性低 ，孔隙 率最高，孔径大小最佳，但材料的生物力学性能有明显下降。结论 超声辅助酶法是一种较好的骨材料去抗原处理方法，但处理 完后对材料的生物力学性能有明显影响，还需要进一步优化实验参数。 [关键词] 异种骨；超声辅助酶法 ；抗原；猪 ，骨移植 [中图分类号] R332 [文献标识码] B [文章编号-I 1671—8348(2015)32—4563—03 骨缺损是骨外科手术中经常遇到的难题，自体骨移植具有 酶。D组 ：新鲜骨 ；无菌生理盐水反复冲洗骨及髓腔 内物质 ；无 取材有限、取材部位易发生并发症 的缺点。异体骨移植来源受 菌湿纱布包裹 ，放置一2O℃冰箱 中备用 。A、B、c组标本处理 限，且有传播疾病的风险。因此，近年来，异种骨移植成为了研 完成后 ，真空低温冷冻干燥机冻干 ，真空包装袋密封 ，25kGy 究热点，但 由于异种骨具有抗原性，移植后可能产生较强的免 的Co60辐射消毒备用 。 疫反应 ，因此在使用前需要进行去抗原处理 。在异种骨 中的除 1．4 检测指标 抗原处理中，酶法脱蛋 白处理 已经成为近来研究的热点 ，胰蛋 1．4．1 材料的大体标本观察及切片组织形态学观察 肉眼观 白酶是一种非特异性 消化酶，可 以消化异种骨表面 的包括 察所制备的各组异种骨移植材料 的形貌特征和结构，并将材料 MHC—I、MHC—II抗原在 内的异种骨抗原[1]，相对于强氧化 用LEICA2500E型切片机制成 5 m厚的硬组织切片，HE染 剂 ，酶 的水解过程温和 ，不会对骨 中无机成分的结构造成破 色观察材料处理后骨组织学形态 。 坏_2]。传统的胰蛋 白酶水解蛋 白需要 12h或更长的作用时 1．4．2 各组骨材料异种抗原的检测 分别检测各组骨材料 a_ 间，近年来研究发现 ，超声波能在一定条件下增加胰蛋 白酶的 Gal抗原、MHC—I和 MHG Ⅱ抗原的表达 ，细胞核苏木素复 活性 ，增加其水解蛋 白的速度 口]。可以将胰蛋 白酶水解蛋 白的 染，DAB显色，光镜下观察不 同处理组 a—Gal抗原、MHC—I和 作用时间缩短至数分钟，而且其分解较为完全。本研究采用超 MHC_Ⅱ抗原分布及强弱情况变化 。 声波辅助胰蛋 白酶的方法对猪异种骨去抗原处理，探讨其 的 1．4．3 、扫描 电镜观察各组骨材料孔 径大小和孔径率 用 影响 。 JSM-5900型电子显微镜对上述制备 的材料进行扫描 电镜观 1 材料与方法 察，每种材料 4个样品，并用 JSM-5900型数字图像分析系统 1．1 实验设备 超声波细胞破碎仪 (美国)，超临界CO 流体 对其孔径大小和孔隙率进行测定，加速电压 20kV。 设备 (德 阳)，JSM一5900型扫 描 电子 显 微 镜 (日本 )，IN— 1．4．4 材料 的力学性能测定 INSTRON8874生物力学测试 STR0N8874生物力学测试系统 (美 国)。 系统对所制备的各