筛选含有目的基因的受体细胞5.ppt

* * 第一章 基因工程 第二节 基因工程的原理和技术 基因工程的基本原理：让人们感兴趣的基因（目的基因）在宿主细胞中稳定和高效表达。 基因工程的基本操作步骤： 1、获得目的基因 2、形成重组DNA分子 3、将重组DNA分子导入受体细胞 4、筛选含有目的基因的受体细胞 5、目的基因的表达 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 请举出三个以上的例子 2、获取目的基因的方法 （1）、从基因文库中获取目的基因。 （2）、人工合成 例:利用PCR技术扩增目的基因 ----适用于目的基因的序列为未知的 ----适用于目的基因的序列为不是很大且已知的 基因文库的构建方法 1）鸟枪法： 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 受体细胞 (直接分离法) 2）反转录法： 目的基因的mRNA 单链DNA 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 基因文库的构建方法 3）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 基因文库的构建方法 总结:如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。 DUCK179制作 (2)利用PCR技术扩增 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ 、 ___________.前提条件： ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 模板(已知基因的核苷酸序列) 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 必须对目的基因有一定的了解， 需要设计引物 ⑥过程： a、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性25℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 人工合成：若基因_____，核苷酸序列又 ______ ，则可用此法。 较小 已知 ①用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 ②用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 2、形成重组DNA分子 ③将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 3、将重组DNA分子导入受体细胞 将目的基因导入 植物细胞 方法 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 基因工程的受体细胞有哪些？如何选择？ 通过目的基因上的标记基因，进行筛选和检测 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组DNA分子吗？ 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 所以要对受体细胞作怎样的处理？ 4、筛选含有目的基因的受体细胞 怎样进行检测？举例说明 *