转化生长因子-β1通过产生活性氧诱导骨髓间充质干细胞分化为肌成纤维细胞.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Vo1．47 No．5 Oct．2015 ·737 · · 论 著 · 转化生长因子一阻通过产生活性氧诱导骨髓 问充质干细胞分化为肌成纤维细胞 贾双双，李伟阳，刘 欣，李丽英 (首都医科大学细胞生物学系，肝脏保护与再生调节北京市重点实验室，北京 100069) [摘 要] 目的：研究转化生长因子一B1(transforminggrowthfactor一131，TGF一131)诱导骨髓间充质干细胞 (boneinalTow— derivedmesenchymalstemcells，BMSCs)向肌成纤维细胞分化的机制。方法：采用全骨髓贴壁培养法体外培养小鼠原 代BMSCs，将对数生长期的P3～P=5代BMSCs作为实验细胞，使用不同浓度的TGF一311诱导BMSCs向肌成纤维细胞分 化，并在此基础上观察加入 自由基清除剂 N一乙酰一半胱氨酸 (N—acetylcysteine，NAC)对其分化的影响。采用实时荧光 定量PCR及Westernblot技术检测BMSCs分化指标ot一平滑肌肌动蛋白(0L-smoothmuscleactin，ot—SMA)、I型胶原[c01． 1agenctl(I)，Colctl(I)]和Ⅲ型胶原[collagen仅1(Ⅲ)，Colotl(il1)]的表达情况。使用2’，7’一diehlorohydrofluoreseein diacetate(DCFH—DA)预孵育BMSCs15min，然后加入TGF一131处理不同时间，检测TGF一311刺激下BMSCs中活性氧 (reactiveoxygenspecies，ROS)的产生，并使用高内涵方法对BMSCs中产生的ROS进行统计分析。结果：TGF．311可以 剂量依赖地诱导BMSCs向肌成纤维细胞分化，上调 0一【SMA、Colctl(I)和 Colctl(Ⅲ)的表达。TGF一311诱导BMSCs分 化的作用可以被NAC阻断。TGF．131在BMSCs中能够引起ROS的产生 ，且该过程迅速而短暂 ，当TGF一311作用30min 时，其在 BMSCs中诱发的ROS达到峰值。结论：rI1GF一131通过产生ROS介导BMSCs向肌成纤维细胞分化。 [关键词]转化生长因子311；间充质细胞；细胞分化 ；活性氧；成纤维细胞 [中图分类号]R329．28 [文献标志码]A [文章编号]1671—167X(2015)05-0737-06 doi：10．3969／j．issn．1671—167X．2015．05．002 Transforming growth factor．B1 inducesdifferentiation ofbone marrow．derived mesenchymalstem cellsintomyofibroblastsva／productionofreactiveoxygen species JIA Shuang—shuang，LIWei—yang，LIU Xin，LILi—ying (DepartmentofCellBiology，MunicipalLaboratoryforLiverProtectionandRegulationofRegeneration，CapitalMedicalU． niversity，Beijing100069，China) ABSTRACT Objective：Theaimofthisstudywastoinvestigatethemechanismunderlyingtrnasforming growthfactor—B1 (TGF一131)induceddifferentiationofbonemalTOW—derivedmesenehymalstem cells (BMSCs)intomyofibroblasts．Methods：PrimarymouseBMSCswereisolatedfrombonemarrowbyflushing thetibiasnadfemursofmice．and passage3topassage5ofBMSCswereused in theexperiments． BMSCsdif