转录因子Stat5a对乳腺癌细胞增殖的影响及其表观遗传学机制探讨.pdfVIP

2596 重庆医学2015年 7月第44卷第 19期 · 论 著 · doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2015．19．002 转录因子 Stat5a对乳腺癌细胞增殖的影响及其表观遗传学机制探讨 张 洁 ，唐培志 ，黄建军 ，谭敦勇 (1．吉首大学医学院生物化学教研室，湖南吉首 416000；2．湘西 自治州人民医院外科 ，湖南吉首 416000) [摘要] 目的 探讨转录因子 Stat5a对人类乳腺癌细胞 (MCF_7)增殖的影响及表观遗传学机制。方法 利用腺病毒介导的 基 因转移技术 ，使 MCF_7大量表达转录 因子 Stat5a，应用活细胞计数 (MTS)法检测细胞增殖情况 ，并以染色质免疫共沉淀(CHIP) 方法 ，检测 p53基 因启动子区域组蛋 白甲基化程度 。最后 以实时定量 PCR进一步确认 p53基 因表达水平 。结果 携带 Stat5a cDNA 的腺病毒感染后 ，MCF_7的数量呈剂量依赖式地增加 。-3病毒感染增殖活性 (M0I)分别为 lO、2O及 3O时，McF-7的细胞 密度较对照组细胞分别增加 7．6031 、18．1237 及 24．8987 。染色质免疫共沉淀分析表明，Stat5a明显导致 p53基 因启动 子 区域组蛋 白甲基化 (H3K27Me3)增加 ，p53基 因表达水平 下降。结论 Stat5a导致 MCF-7抑癌基 因 p53启动子组蛋 白甲基化 ， 使启动子活性降低 ，导致细胞的异常增殖。 [关键词] 转录因子 Stat5a；乳腺肿瘤细胞；表观遗传学；组蛋 白甲基化；染色质免疫共沉淀 [中图分类号] R737．9，Q786 [文献标识码] A [文章编号] 1671—8348(2015)192596—04 Influence0ftranscription factorStat5a (11proliferationofhuman breastcancercellsand itsepigeneticmechanisms ZhangJie，TangPeizhi，HuangJianjun ，TanDunyong (1．DepartmentofBiochemistry，MedicalCollegeofJishouUniversity，Jishou，Hunan416000，China； 2．DepartmentofSurgery，HunanWestAutonomousRegionPeopelsHospital，Jishou，Hunan416000，China) [Abstract] Objective ToinvestigateandclarifytheeffectofStat5aonproliferationofhumanbreastcancercells(MCF-7) andlodetectthechangesofepigeneticsignatureonhtepromoterregionofp53gene,．Methods Stat5awasoverexpressedinhuman breastcancercells(MCF-7‘)byusingadenovirusmediatedgenetransfertechnology．ThlecellproliferationwasexaminedbyMTS assay．ChiPassaywasused1ocheckthetrimethylationoflysine27onhistone3 (H3K27Me3)ofp53genepromoterregion．．Fur— thermore，qRT--PCR andwesternblotwerealsoappliedtoconfirm theexpressionofp53gene．Results ThenumberofMCF 7in— creasedin a dose dependentmanner．Compared wiht thatofcontrolgroup，thecelldensityofMCF-7 increased 7．603 1 ， 18．1237 and24．8987 whentheMO1were10，2