转染骨形态发生蛋白-2基因的血管内皮祖细胞的构建.pdfVIP

广东医学 2013年 2月第 34卷第 3期 GuangdongMedicalJournal Feb．2013，Vo1．34，No．3 · 333 · ；筌 捌 转染骨形态发生蛋 白一2基 因的血管 内皮 祖细胞的构建术 孙欣，曾荣 ，吴浩俊，胡资斌 ，陈思圆，魏劲松，林颢 广东医学院附属医院骨科(广东湛江524001) 【摘要】 目的 通过克隆、构建pEGFP—BMP一2表达质粒载体，观察骨形态发生蛋白一2(BMP一2)基因在 血管内皮祖细胞(EPCs)中的表达与分布。方法 采用密度梯度法分离兔骨髓的单个核细胞 ，应用细胞荧光化学 法及DAPI染细胞核法鉴定培养的细胞；BMP一2重组于pEGFP—C3中，经酶切、测序分析鉴定后，将其转染入 EPCs内并筛选稳定转染细胞。结果 鉴定培养的细胞为EPCs；pEGFP—C3一BMP一2表达质粒载体经双酶切鉴 定、测序分析证实其构建成功；成功转染的EPCs中绿色荧光弥散分布于细胞胞质 内，表明pEGFP—C3一BMP一2 蛋白高表达，表达率为46％。结论 分离与培养 出EPCs；构建的pEGFP—C3一BMP一2表达质粒载体转染后， BMP一2蛋白高效表达于EPCs胞质中。 【关键词】 血管内皮祖细胞；骨形态发生蛋白一2；质粒构建；基因转染 Constructionofbonemorphogeneticprotein一2expressingendothelialprogenitorcells． SUN Xin，ZENGRong， WUHao一 n，HUZi—bin，CHENSi—yuan，WEIring—song，LINHao．DepartmentofOrthopedics，AffiliatedHospital ofGuangdongMedicalCollege，Zhanfiang524001，China Correspondingauthor：ZENG舶 A【bstractl Objective Toconsctructedthebonemorphogeneticprotein一2(BMP一2)expressionvector，thusto investigatetheoriginalandpost—transfectioncharacteristicsofendothelialprogenitorcells(EPCs)fortheexpressionand distributionofBMP一2inEPCs．M ethods Rabbitbonemarrowmononuclearcellswereisolatedthroughdensitygradient separation，whileimmunohistochemistryandimmunofluorescencecytochemistryassayswereusedtoidentifythesu~ace markersandbiologicalfunctionsofEPCs．BMP一2wasengineeredintothepEGFP—C3vectoraspEGFP—C3一BMP一 2，whichwasconfirmedbyenzymecuttingandsequencinganalysis．Results ThecuhruedEPCswereconfirmedcharac— teristiclyandthepEGFP—C3一BMP一2vectorwasalsosuccessfullyconstructed．AbundantexpressionofBMP一2was detectedinEPCstransfectedwithpEGFP—C3一BMP一2．Underfluorescencemicroscope．dispersedgreenfluorescence wasobservedinthecytoplasm ofEPCs，indicatingthehighexpressionofpEGFP—C3一BMP一2proteinwiththeexpress— ingrateof46％ ．Conclusion TheEPCsaresuccessfullycultured．EfficientexpressionofBMP一2isprovedinpEGFP— C3一BMP一2expressionvectortransfectedEPCs． 【Key