122顶空气相色谱法检测奥吉布宁透皮贴剂中的乙酸乙酯及环己烷.doc

122顶空气相色谱法检测奥吉布宁透皮贴剂中的乙酸乙酯及环己烷目的：建立顶空气相色谱检测奥昔布宁透皮贴剂中乙酸乙酯及环己烷的方法。方法：采用顶空程序升温气相色谱法，顶空平衡温度100，平衡时间25.0?min，色谱柱为DB-624（30?m×0．53?mm×3?μm），柱温初始为60，保持8?min，然后以60·min-1的速率升温到250，保持10?min。结果：乙酸乙酯在0．21～2.20mg·g?-1浓度范围内线性关系良好，相关系数0.999，回收率98．2％，最低检测限为1?μg；环己烷在0.15～1.23?mg·g-1浓度范围内线性关系良好，相关系数0.999，回收率98.5％，最低检测限为1μg。结论：本法快速、可行，检测结果较为满意。前?言奥昔布宁是一种治疗老年型尿失禁的药物，将其剂型改为透皮贴剂后，可以稳定血药浓度，避免首过效应，减少副作用，更加有利于患者的使用。该制剂已在国外上市。由于其制备工艺中使用了有机溶媒——乙酸乙酯和环己烷，根据ICH关于残留溶剂检查的规定，在该制剂的注册标准中规定了二者的检查限度，并对原企业标准中的检测方法进行了修改，使其更加合理，准确。经对方法学内容的考察，证明修改后的方法可行，结果可靠。实?验1?仪器与试药Agilent?6890N气相色谱仪及7694E顶空进样器（美国安捷伦公司）。乙酸乙酯、环己烷和二甲基甲酰胺均为分析纯化学试剂。供试品透皮贴剂由美国华生制药股份有限公司生产，每贴含奥吉布宁为36?mg。2?气相色谱分析条件气相色谱条件设置：色谱柱为DB-624（30?m×0．53?mm×3?μm）；载气为氮气（99．999％）；采用恒压模式，柱头压为30?kPa；程序升温：柱温初始为60，保持8?min，然后以60·min-1的速率升温到250，保持10?min；进样口设置温度为200，分流比为20：1；FID检测器设置温度为250。顶空进样条件设置：平衡温度为100；平衡时间为25．0?min：加压时间为0．2?min；进样时间为1?min；进样环体积为1?mL。3?标准曲线的制备及线性关系的考察精密称取乙酸乙酯250，125，2500?mg，分别置于3个25?mL量瓶中；再精密称取环己烷150，750，1500?mg，分别置于上述3个量瓶中。用二甲基甲酰胺稀释至刻度并准确称重，摇匀，作为对照品溶液～。量取上述3种不同浓度的对照品溶液各9μL，分别置于已知质量且装有空白贴剂（取供试品贴剂去除保护层后，贴在大小适宜的医用纱布上，置105烘箱中过夜，取出后放置室温即得）的顶空瓶中，立即加盖，密封，准确称重，求得对照品溶液的质量。按上述气相色谱条件进行检测。对照品色谱图见图1-A，空白贴剂色谱图见图1-C。 在该色谱条件下，乙酸乙酯、环己烷和溶剂（二甲基甲酰胺）可完全分离，保留时间分别为3.5，4.1和9.8?min，见图1-A。以峰面积A为纵坐标，对照品质量W（mg）为横坐标，求得3个不同浓度下乙酸乙酯、环己烷回归方程分别为：W＝6.06×l0?-5A?－7.41×10ˉ3????r?＝?0.9999W＝2.16×l0?-5A?－2.55×10ˉ3????r?＝?0.9999乙酸乙酯和环己烷的线性范围分别为0.21～2.20，及0.15～1.23?mg·g-1。在注册标准中规定乙酸乙酯的限度为1.60?mg·g-1，环己烷的限度为1.00?mg·g-1。由以上数据可以看出，乙酸乙酯及环己烷在各自的限度值附近线性良好。4?最低检出限由于本实验为限度检查，所以根据低浓度样品的信噪比计算最低检出限，当信噪比为3时，乙酸乙酯及环己烷的最低检出限均约为1?μg。5?回收率试验取空白贴剂，放入顶空瓶中，加人对照品溶液?9μL，立即密封，依法操作。乙酸乙酯及环己烷的平均回收率为98．2％和98．5％，RSD分别为1．7％和2．0％（n＝5）。6?基质影响的考察本实验的方法为顶空气相色谱法，而贴剂的物理特性决定了被测物对照品与供试品在顶空瓶中分处于不同的平衡状态，即气液平衡和气固平衡，这就可能存在基质效应的影响。由于供试品贴剂的物理状态不能改变，而标准曲线的制备又将直接影响到测定结果的准确性，因此只能从改变制备标准曲线时对照品所处的平衡状态入手，来消除基质效应。我们首先量取对照品溶液I～各9μL，分别置于不同的顶空瓶中（顶空瓶内分别为不加任何基质、加医用纱布为基质及加空白贴剂为基质），然后立即加盖，密封，准确称重，求得对照品溶液的质量。按上述气相色谱条件进行检测，制备3种不同平衡状态下的标准曲线。不加任何基质时乙酸乙酯、环己烷回归方程分别为：W?＝3．67×10ˉ5?A＋9.80×10ˉ3????r＝0．9998W?＝1．48×10ˉ5?A＋5.78×10ˉ3????r＝0，9998加医用纱布为基