分子生物学试验技术理论与试验.doc

PAGE  PAGE 7 生物化学与分子生物学实验原理 Principles of Biochemistry and Molecular Biology Techniques 课程简介 本课程主要是介绍常用分子生物学技术测定的原理和机制，以利于研究生了解分子生物学常用技术，并能活用这些技术。这门课既不同于一般的分子生物学理论课，也不同于实验方法流程的介绍。该课程分实验技术理论和实验操作两部分。实验技术理论部分主要通过基因重组技术、目的基因的获得、分子杂交、基因多态性和基因表达调控等，介绍分子生物学实验的方法、设计思路、原理、操作技巧及应用等。力求培养学生掌握现代分子生物学实验的基础与操作要点，同时邀请校外资深专家介绍分子生物学的新技术及新方法，为今后进一步深入研究奠定良好基础。实验操作部分另设课程为“分子生物学实验技术”。 This course includes two sections. One section focus on the principles of the techniques used to isolate, identify, modify and analyze three key molecules: DNA, RNA and proteins. The first section includes: DNA recombination technology, molecular hybridization, gene polymorphism, and regulation of gene expression. The second section will be a separate course named the Techniques of Molecular Biology. The goal of this course is to giving students an on-bench training of basic molecular biology techniques. 教学大纲? 一、课程名称：生物化学与分子生物学实验原理 二、总学时数及学分： 32学时，1.5学分 理论课 32学时 三﹑授课对象： 博士生、硕士生 预修知识要求：要求有化学、生物学、遗传学、生物化学及微生物学相关知识 四、教学目的及要求： 目的：通过教学力求培养博士生、硕士生掌握现代生物化学与分子生物学实验的基础理论与基本操作要点，为今后的研究工作奠定良好基础。 要求：要求学生掌握生物化学与分子生物学实验的原理与研究方法，选择原则，为今后的科研工作奠定良好基础。 五、理论课内容： 校外资深专家介绍的分子生物学的新技术及新方法将根据内容进行安排。 第一章 重组DNA技术（4学时） 第一节 重组DNA概述 1、重组DNA技术诞生的理论与实验基础 2、重组DNA技术问世的重大意义 3、DNA重组技术操作程序 第二节 重要的工具酶 1、限制性核酸内切酶 2、DNA连接酶 3、DNA聚合酶与反转录酶 4、T = 4 \* GB1 ⒋多核苷酸激酶 5、碱性磷酸酶 第三节 基因克隆用载体 1、载体的特征与分类 2、各类载体特点及其应用 第四节 目的基因及其获得方法选择 1、直接从基因组DNA获得目的基因 2、基因文库的构建和筛选 3、PCR方法制备目的基因 4、人工合成目的基因 第五节 重组DNA策略 目的基因与载体的酶切与连接方法 第六节 重组DNA导入宿主细胞 转化、转导、转染及感染 原核细胞转化原理 外源DNA导入真核细胞的方法 第七节 目的基因扩增与筛选 1、遗传学筛选方法 2、酶切鉴定方法 3、PCR鉴定 4、核酸杂交法 5、免疫学鉴定方法 6、DNA测序方法 第二章 聚合酶链反应（PCR）（4学时） 第一节 PCR基本原理和影响因素 第二节 常用PCR分类、简介 1、逆转录PCR 2、定量PCR 3、多重PCR 4、彩色PCR 5、重组PCR 6、不对称PCR 7、膜结合PCR 8、固着PCR 9、原位PCR 10、反向PCR 第三节 PCR在分子生物学中的应用 1、 cDNA文库的制备与筛选 2、直接测序 3、染色体区带中特异片段的克隆 4、检测突变基因 5、用简并引物法扩增未知序列 6、应用PCR法标记DNA探针 第四节 PCR与新基因的寻找. PCR在临床医学中的应用 1、病原体检测 2、遗传病的基因诊断 3、肿瘤的早期诊断与转移确定 4、用于器官移植的配型选择 第五节 PCR的难点解析 第三章 核酸杂交 (4学时) 第一节 核酸杂交基本原理 1、核酸的变性、复性 2、核酸复性的动力学 3、核酸的变性、复性影响因素 第二节 探针