育性改变油菜.docVIP

前 言 本标准由中华人民共和国农业部科技教育司提出。 本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。 本部分起草单位：农业部科技发展中心、中国农业科学院油料作物研究所。 本部分主要起草人：卢长明、宋贵文、转基因植物及其产品环境安全检测 育性改变油菜 1 范围 本标准规定了对改变育性的转基因油菜雄性不育系、恢复系及其杂种后代育性、生存竞争能力、外源基因漂移和生物多样性影响的检测方法。 本标准适用于转基因油菜育性、生存竞争能力、外源基因漂移和生物多样性影响的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。 GB 4407.2 经济作物种子 油料类 NY/T 721 转基因油菜环境安全检测技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 育性改变油菜 fertility altered rapeseed 通过基因工程技术将影响育性的外源基因导入油菜基因组而培育出的油菜不育系、恢复系及其杂种后代。 3.2 花粉可染率 pollen stainability 成熟的新鲜花粉用1%醋酸洋红染色后，可染色的正常花粉在观察的总花粉中所占比率。 3.3 不育性保持率 maintained male-sterility 转基因油菜不育系与常规品种杂交后，杂种群体中完全雄性不育单株所占比率。 3.4 不育性恢复度 restorability of restorer line to male-sterile line 恢复系对雄性不育系的育性恢复程度。用转基因油菜不育系与恢复系杂交F1群体的自交结实性、恢复株率和不育株率表示。 3.5 异交率 outcrossing rate 改变育性的转基因油菜与非转基因油菜品种或相关近缘种自然杂交的比率。 3.6 基因漂移 gene flow 改变育性的转基因油菜中的外源基因通过花粉向油菜栽培品种或相关近缘种自然转移的行为。 4 要求 试验材料的质量应达到GB 4404.2中对油菜生产用种的要求。 资料记录和实验安全控制措施按NY/T 721.1的要求执行。 5　育性检测 5.1 转基因油菜不育系 5.1.1 试验材料 转基因油菜不育系；转基因油菜不育系与3个非转基因油菜常规品种的杂种F1。以育性正常的非转基因油菜品种作为花粉育性正常的对照（CK1），波里马雄性不育系作为花粉败育的对照（CK2）。 5.1.2 检测内容 花粉可染率、自交结实性和不育性保持率。 5.1.3 试验设计 随机区组设计，3次重复，小区面积为6 ㎡，株距、行距分别为20 cm和40 cm。 5.1.4 田间管理 按当地常规栽培管理方法进行。 5.1.5 花粉可染率检测 在油菜盛花期，从转基因油菜不育系、CK1及CK2小区各选择典型单株10株，每株取刚开放的2朵花，从花朵中取出花药，置于载玻片中央，滴加一滴1% 醋酸洋红，用镊子和解剖针释放花粉后，盖上盖玻片，在显微镜下观察、计数可染色花粉数和花粉总数。每朵花观察500粒花粉左右。 5.1.6 自交结实能力检测 从转基因油菜不育系、CK1及CK2的各小区分别选择30个单株，对主花序（去除开过花和正在开花的花朵以及幼小的花蕾后保留20个花蕾）进行套袋自交，调查每荚结实粒数。 5.1.7 不育性保持率检测 从CK1 、CK2和3个F1杂种的各小区分别选择30个单株，对主花序（去除开过花和正在开花的花朵以及幼小的花蕾后保留20个花蕾）进行套袋自交，调查每荚结实粒数。 5.1.8 结果分析 5.1.8.1不育性分析 分别计算转基因油菜不育系、CK1及CK2花粉可染率总平均数和每个材料三次重复的平均数的标准差；分别计算转基因油菜不育系、CK1及CK2自交后每荚结实粒数总平均数和每个材料三次重复的平均数的标准差。 在CK1正常可育和CK2正常不育的前提下，通过t测验，分析转基因油菜不育系的花粉可染率和每荚结实粒数与CK1和CK2是否存在显著差异。如果花粉可染率和自交后每荚结实粒数均显著小于CK1，表示雄性不育性显著；如果花粉可染率和自交后每荚结实粒数等于或小于CK2，则表明雄性不育性彻底；如果花粉可染率与CK1无显著差异，而自交后每荚结实粒数显著低于CK1，表明具有自交不亲和性；如果花粉可染率和自交后每荚结实粒数与CK1无显著差异，表明花粉可育。 5.1.8.2不育性保持率分析 计算CK1 、CK2和3个F1杂种每个自交单株的每荚平均结实粒数；在CK1结实正常、CK2