遗传病的诊断（C14）.PPT

《医学遗传学》网络课程 主讲人：郭奕斌 中山医学院医学遗传学教研室 第十一章、遗传病的诊断 第五节、基因诊断 五、基因诊断的应用 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 三 聚合酶链式反应技术 1、原理：在引物介导及酶促作用下，在Ep管内按体内DNA 复制原理，合成特定DNA片段的扩增过程，即体外DNA复制过 程。 2、反应过程： (1) 模板变性：92℃～95℃ ，DNA 解链； (2) 引物退火：37℃～60℃ ，引物与靶点结合； (3) 引物延伸：70℃～72℃ ，合成新DNA。 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * PCR原理 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 巢式PCR原理 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 热变性 退 火 引物延伸 3、PCR扩增的成分：①模板DNA；②引物；③DNA聚合酶；④4种脱氧单核苷酸； ⑤适当的pH值及Mg2+ 4、PCR技术的特点：操作简便、省时、灵敏度高、特异性强、标本需要量少、应用范围广、自动化程度高。 5、常用技术：(1)PCR；(2) PCR-Sequencing；(3) PCR-RFLP/STR；(4) PCR-SSCP/DHPLC；(5)ARMS/RE * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * PCR扩增DNA片段的电泳结果 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * VNTR多态性的电泳结果 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 六基因诊断与产前诊断趋势 1、基因诊断的技术方法进一步发展简化； 2、可进行基因诊断的病种增多； 3、从母体外周血分离胎儿细胞进行产前基因诊断； 4、种植前基因诊断。 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * 七分子遗传学新技术及应用 (一) PCR技术的进展 1、重组PCR；2、定量PCR；3、原位PCR； 4、低严谨PCR；5、增效PCR；6、巢式PCR； 7、多重PCR；8、RT-PCR；9、荧光定量PCR； 10、长片段PCR；11、同源基因定量PCR； 12、低严谨性特异性单链引物PCR； * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * (二) 基因突变检测方法的进展 1. 突变筛查方法 酶裂解法：RNase A, CFLP 化学裂解法：CCM, CDI 电泳法：SSCP, DGGE, HA 2. 突变诊断方法及其应用 ASO, ASA(ARMS), AIRS, PEX, LCR, PCR－EIA, DS, SNP，DHPLC，测序，DNA池扩增技术，挂锁FISH,比较基因组杂交(CGH)，全基因组扫描,DNA芯片。 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * (三) 基因克隆新技术 1. 消减杂交技术 2. 任意引物PCR 3. 差异展示PCR 4. 基因表达系列分析 * ****《医学遗传学》CAI教学 **** * * *