学习制备土豆凝集素.PPT

细胞生物学实验 二、 实验原理： ③ 凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。 ④ 凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。 三、实验仪器 * * Company Logo 南京晓庄学院 生命科学系实验教学中心 实验一 细 胞 凝 集 反 应 一、实验目的： 1. 学习制备土豆凝集素。 2. 掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚的原理。 3. 观察凝集的现象。 ① 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合成为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化、免疫反应及肿瘤发生等过程都和细胞表面的分枝状糖分子有关。　 ② 动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的必要组分。　　 二、 实验原理： 显微镜、粗天平、载玻片、滴 管、 离心管、离心机等. 土 豆 块 茎 鸡血 细胞 四、实验材料 五、实验内容与步骤 1. 凝集素粗提液制备： 用天平称取去皮的土豆块茎2g+10mlPBS缓冲液，浸泡2h→粗提液中含有可溶性土豆凝集素。 2. 鸡红细胞悬液制备： 以无菌方法抽取鸡血注射器中抽取3.8%柠檬酸钠1ml抽取鸡静脉血液2ml，用生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞液。 五、实验内容与步骤 3. 细胞凝集反应现象的观察与讨论：用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。 本实验过程很简单，只需要将植物凝集素与红细胞混合后用低倍显微镜观察现象即可。具体如下： 红细胞悬液1滴 PBS液1滴 对照组 红细胞悬液1滴 凝集素1滴 实验组 五、实验内容与步骤 4、实验小结：总结实验过程中操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。 六、实验结果 图1 PBS+2%血细胞液 图2 凝集素+2%血细胞液