第二章-第一节基因操作的工具酶.pptVIP

大肠杆菌DNA聚合酶I （E。Coli DNA pol I）是Kornberg A. 1956年首先从大肠杆菌E。Coli 细胞中分离出来的。它是一种多功能性的酶，包括 3 种不同的酶活力： 5′- 3′聚合酶活性 以双链DNA为模板，催化单核苷酸结合到引物的3′-OH末端，并不断延伸。 5′- 3′外切酶活性 将双链DNA中游离的5′末端逐个切去。 3′ - 5′外切酶活性 将游离的双链或单链DNA的3′端降解。不过对于双链的降解可被5′-3′的多聚活性所抑制。 CCG GGCTATCGGA CCG GGCTATCGGA Pol I + Mg2+ A T A G CCT CCGATAGCCT GGCTATCGGA CCGATAGCCT GGCTA CCGATAGCCT GGCTATCGGA Pol I + Mg2+ CCGATAGCCT GGCTA Pol I + Mg2+ T 大肠杆菌DNA聚合酶I 的三种用途 A. 制备高比活度的DNA探针 利用其5′ 3′的外切酶活性及其聚合酶活性。 B. 用于DNA连接后的大缺口填充 利用5′ 3′的聚合酶活性。 C. 用于DNA的序列分析 利用5′ 3′的聚合酶活性。 大肠杆菌聚合酶I的应用示例 CCGATAGCCT G