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丙氨瑞林对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长及FHIT表达影响
丙氨瑞林对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长及FHIT表达影响[摘要] 目的 观察醋酸丙氨瑞林对子宫内膜癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及可能的作用机制。 方法 将HEC-1-B细胞注入裸鼠左前肢近腋窝处皮下,选24只雌性荷瘤裸鼠随机分为4组,即低剂量组(18 μg/kg)、中剂量组(36 μg/kg)、高剂量组(72 μg/kg)和空白对照组(0 μg/kg),采取肌肉注射方式给药4周。将瘤体完整取出,测量体积、绘制生长曲线、计算抑瘤率,并用免疫组织化学法检测瘤组织中FHIT蛋白的表达。 结果 ①随着醋酸丙氨瑞林浓度由低到高,癌细胞受抑制渐趋明显,低、中、高剂量组抑瘤率分别为17.0%、24.1%、42.1%,且与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。②免疫组织化学结果显示,各干预组的FHIT蛋白表达水平较对照组明显升高,且组间差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 醋酸丙氨瑞林对子宫内膜癌皮下移植瘤生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系,其机制可能与上调FHIT蛋白表达有关。
[关键词] 子宫内膜癌;丙氨瑞林;移植瘤
[中图分类号] R737.33[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701(2012)12-0006-03
子宫内膜癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,严重危害着女性的健康。近年来随着对促性腺激素类似物GnRH-a研究的不断深入及临床工作者追求低毒高效安全的肿瘤内分泌治疗方法热情的不断高涨,使其在治疗子宫内膜癌方面越来越受到人们的青睐。GnRH-a是人工合成的促性腺激素,文献报道[1,2]其对子宫内膜癌的治疗已取得一定的效果。本研究通过不同剂量国产GnRH-a醋酸丙氨瑞林对裸鼠人子宫内膜癌移植瘤的生长及FHIT蛋白表达的影响,探讨其对子宫内膜癌的治疗作用及可能的机制,为GnRH-a在子宫内膜癌临床治疗方面提供理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料
人子宫内膜癌HEC-1-B细胞株,BALB/c雌性裸小鼠26只,醋酸丙氨瑞林,兔抗人FHIT多克隆抗体,免疫组织化学PV试剂盒。
1.2 细胞培养
将子宫内膜癌细胞株HEC-1-B培养于10%标准胎牛血清DMEM培养基中,温度37℃,pH 7.2,相对饱和湿度为40%~60%,CO2体积分数为5%,当细胞达到70%~80%融合时,收集对数生长期的细胞制备成浓度为3.0×106/mL的单细胞悬液备用。
1.3 制备人子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型及生长检测
于裸鼠左前肢近腋窝处皮下注射子宫内膜癌细胞株HEC-1-B细胞悬液0.2 mL(约含6×106个细胞)后观察:当瘤体直径约0.3~0.5 cm时将瘤体最大和最小的两只裸鼠舍去,剩余的随机分成4组,分别给予18 μg/kg、36 μg/kg、72 μg/kg醋酸丙氨瑞林及生理盐水背部肌肉注射,1次/d,共4周。每4天测量1次瘤体的长径a和短径b,计算其体积(mm3)=a×b2×0.52。实验后计算抑瘤率(IR%)=[1-治疗组平均肿瘤体积/对照组平均肿瘤体积]×100%。抑瘤率>15%为药敏阳性。
1.4 免疫组织化学法检测FHIT蛋白在移植瘤中的表达
将瘤体标本经10%甲醛固定、石蜡包埋,制成4 μm左右切片,免疫组化染色后脱蜡浸水;热修复2 min,3% H2O2室温孵育灭活内源性过氧化氢酶;滴加兔抗人FHIT多克隆抗体(1∶75),4℃湿盒过夜;加二抗,PBS浸洗后DAB显色,最后苏木素衬染、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封片、显微镜观察。阴性对照组用PBS代替一抗。结果判断标准:免疫组织染色后,FHIT蛋白在移植瘤中的阳性表达为棕黄色或棕褐色颗粒,主要定位于胞浆内,少部分定位于胞核。每张切片随机选取5个不连续、不重复的高倍视野(×400),用病理图像分析软件分析各切片阳性产物的灰度值,取均数后行统计学处理。
1.5 统计学处理
数据采用SPSS 16.0软件行统计学处理,计量数据以(x±s)表示,采用单因素方差分析及LSD-t检验,P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 裸鼠移植瘤的形成及受不同干预后瘤体变化情况
接种子宫内膜癌细胞悬液后,局部稍发红、肿胀,后出现圆形或椭圆形的瘤体逐渐增大,且边界清楚,质由软变硬,活动较好。裸鼠逐渐出现消瘦,反应力、活动力下降等症状。对照组肿瘤体积增长较快,其余各组均受到不同程度的抑制,而且随着剂量的增加移植瘤生长明显减慢。
2.2 绘制体积变化曲线(图1)
可见各组肿瘤生长曲线斜率不同,斜率越小,肿瘤生长速度受抑制越明显,各组之间差异有统计学意义(P < 0.05)。同时可以看出干预组较对照组瘤体积均较小,差异有统计学意义(P < 0.05),各组瘤体
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