细胞核分离和核酸鉴定.pptVIP

实验6 细胞核的分离与核酸的鉴定（Separation of cell nuclei and identification of nucleic acids）;1.掌握离心技术的原理及离心机的使用； 2.熟悉提取分离细胞核、细胞质的方法； 3.熟悉鉴定核酸的方法；;一、核酸的种类及其分布;二、分离细胞质与细胞核;出杀勋召沽蠢布唁宦瞅曳霸晕拂肺拢辣孰陀沽付枚史更吱磁丝曙萤豪裕黎细胞核的分离与核酸的鉴定细胞核的分离与核酸的鉴定; 利用各细胞器在一定介质中的沉降速度的差异，可采取离心的方法，将细胞器分离出来。;离 心 方 法;差速沉降离心法 (differential centrifugation); 差速沉降离心法一般用于分离沉降速度相 差较大（一般为10倍）的颗粒。?;每种纯样品成份在介质溶液中的沉降速度可以表为： V=d2÷18×(σ-s)÷η×ω2r。;待分样品的沉浮行为如何确定？;速率区带离心法; 样品在密度较高、密度梯度较为陡峭的介质溶液中进行离心，具有不同密度的颗粒向上浮起，一直移动到与它们的密度相等的等密度点的特定梯度位置上，形成几条不同的区带，这就是等密度区带离心法。 ;优点：a. 分离效果好，可一次获得较纯颗粒。 b. 适应范围广,能象差速离心法一样分离具有沉降 系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒。 c. 颗粒不会挤压变形。 缺点：a.离心时间较长； b.需要制备梯度；操作严格，不易掌握。;三、核酸的鉴定;（1）核糖核酸的鉴定;（2）脱氧核糖核酸的鉴定;（1）分离细胞质与细胞核; 实 验 流 程 图 ; 编　 号;2．鉴定：取试管三支，编号，按下表操作:;表1.核糖核酸的鉴定;1．规范操作，防止滴管、试剂的污染。 细核悬液的平铺要轻柔； 浓酸的取用要小心；试剂为浓酸配制，注意安全； 使用离心机注意平衡，转速从低到高； 清洗滴管。;思 考;实验七 　血糖测定（葡萄糖氧化酶-过氧化物酶　 　　法）及肾上腺素对血糖浓度的影响 1.血糖的来源与去路？ 2.激素对血糖的调节？ 3.什么是高血糖、低血糖，尿糖？ 4.实验原理及操作步骤。;Thank You !;生物化学设计性实验安排 经讨论决定，本学期第八次实验是设计性实验，也作为实验考核内容???占实验总成绩的30%（共9分）。 一.内容：牛血清白蛋白的提取与鉴定 二.设计方案的要求和时间： 要求每大组1份，写明实验目的、实验原理、操作步骤或流程、仪器和试剂、预测结果、参考文献或资料等项目。于第七次试验前完成，第七次实验时交给相应实验室的实验教师。 实验设计成绩4分（科学合理3分、可操作性1分） 三.实验实施的时间和要求：按最后一次实验的时间安排，分班按课程表进行实验，要求每人独立完成实验操作并当堂完成实验报告。 实验操作成绩3分（基本操作1分、试剂盘整理有序1分、实验环境卫生1分） 实验报告成绩2分（目的原理0.5分、操作流程0.5分、结果0.5分、分析讨论0.5分） 生物化学实验室 2011年11月