植物组织中丙2醛含量的测定.docVIP

实验 活性氧(reactive oxygen species，ROS)MDA进行测定。 一、实验目的 1.重点掌握MDA测定的原理和测定方法。 2.了解丙二醛（ MDA ）、原理 植物器官在衰老或逆境下，膜脂过氧化丙二醛（ MDA ）MDA是膜脂过氧化作用的最终分解产物，其含量可以反映MDA的含量可以反映生物体衰老和遭受逆境伤害的程度。 测定原理：丙二醛在酸性和高温条件，可以与硫代巴比妥酸（ TBA ）反应生成红棕色的三甲川（ 3,5,5 —三甲基恶唑 2,4- 二酮），在 532 nm 处有最大光吸收，在 600 nm 处有最小光吸收TBA的反应产物在532 nm处也有吸收，但最大吸收波长在450 nm，为了消除糖类物质对MDA-TBA 反应C ( μmol/L ) = 6.45 ( A 532 － A 600 － 0.56A 450 式中： A 450 、 A 532 和 A 600 分别表示 450 nm 、 532 nm 和 600 nm 处的吸光度值。算出植物样品提取液中 MDA 的浓度后，可进一步算出其在植物组织中的含量。 、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 植物的根或叶片。 （二）试剂 110% 三氯乙酸（ TCA ）。 2. 0.5% 硫代巴比妥酸（ TBA ）溶液：称取硫代巴比妥酸 0.5g 溶于 ％ TCA 溶解并用其定容至 l00 mL 。 （三）仪器设备 研钵，恒温水浴锅，分光光度计，离心机，天平，刻度试管，移液管 、实验步骤 1. MDA 的提取与显色 称取植物材料0.2g-0.5（根据材料的受伤害程度） ，剪碎，加入 2 mL 10% TCA 和少量石英砂，研磨至匀浆，再加3mL TCA 进一步研磨，匀浆转移至试管中，加入5mL的TBA将试管放入沸水浴中煮沸 10 min（自试管内溶液中出现小气泡开始计时），取出试管并冷却，3000 r/min 离心 15 min ，取上清液并量其体积。 2.以不加样品为对照 0.6 ％ TBA 溶液为空白测定 532 nm 、600 nm和450 nm 处的吸光度值。 五、结果计算 MDA 含量 ( μmol/g)=MDA-TBA的反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高。 MDA-TBA的反应的加热时间，沸水浴控制在10~15min。时间太长或太短均会引起532nm的吸光度下降。 作业 1. 比较你测定的植物在不同的环境条件（或不同植物在同一逆境下），植物组织中MDA含量，并分析其原因？ 2. 测定MDA含量有何意义？ 3. 简述植物组织中MDA含量测定的原理？并说明哪些因素干扰MDA含量测定，应如何消除。 4.让学生阅读两篇参考文献 ?赵世杰；?许长成；?邹琦；?孟庆伟植物组织中丙二醛测定方法的改进植物生理学通?陈贵；?胡文玉；?谢甫绨；?张立军提取植物体内MDA的溶剂及MDA作为衰老指标的探讨 植物生理学通陈贵;?张立军植物体内MDA含量单位与计算方法的一些问题 植物生理学通 李玲, 李娘辉, 蒋素梅等主编. 植物生理学模块实验指导，科学出版社，2009. 李彩霞 2013.11.12编写 2014.10.25修改