人脐带间质干细胞的分离纯化及生物学特性鉴定.pdfVIP

临床检验杂志2008年第26卷第1期 Chinese Journal of Clinical Laboratory Science，2008，Vo1．26，No．1 5 文章编号：1001—764X(2008}01-0005-02 中图分类号：R446．11 文献标识码：A ·研究快报 · 人脐带间质干细胞的分离纯化及生物学特性鉴定 乔纯 ，许文荣 ，朱伟 ，胡嘉波 ，钱晖 ，阴晴 ，杨欢 ，王兴忠 ，严永敏 ，--G-~ ，陈永昌 (1．江苏大学医学技术学 院，江苏镇江212013；2．江苏大学附属医院临床检验中心，江苏镇江212001；3．江苏大学医学院，江苏镇江212013) 关键词：间质干细胞；脐带；分化 近年来，间质干细胞(mesenchymal stem cells， 期较短，经胰酶消化传代后可重新贴壁、完全伸展， MSC)以其易于在体外分离培养、高增殖潜能等生物 变为长梭形，体外可扩增26代细胞。传代培养的对 学特性，已经成为备受关注的治疗载体。本文探讨 数增殖期为3～5 d；接种后第6 d开始细胞生长逐 人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchy一 渐缓慢，进入平台期，与骨髓MSCs的生长曲线非常 mal stem cell，hUCMSC)的分离培养及其生物学特 类似，呈“s”形。流式细胞术分析显示：CD29， 性。新鲜的脐带在征得其所有者父母同意后，采用 CD44，CD95，CD105，HLA—I表达 阳性，CD34， 组织块贴壁培养方法，在含青霉素和链霉素的磷酸 CD38，CD71，HLA—DR不表达。染色体核型正常。 盐缓冲液中浸泡约15 min后洗净血液，再将脐带尽 第3代细胞周期分析显示：G。／G。，G ／M和s期分 可能地剪碎，用含 10％胎牛血清、5％马血清的L一 别为88．86％，5．69％和5．45％。经过体外诱导，碱 DMEM，37℃，5％CO ，饱和湿度条件下培养获得 性磷酸酶、Von Kossa和油红0染色均呈不同程度 hUCMSC。应用PKH26和二咪基苯基吲哚(DAPI) 的阳性。RT—PCR结果显示，诱导后的细胞分别表 染色方法进行形态学观察；应用流式细胞术测定细 达了骨形成蛋白一3(BMP一3)和过氧化物酶体增殖体 胞周期及表面抗原特征，试剂为FITC—CD34、CD71、 激活受体^y2(PPAR~／2)等基因。hUCMSC还表达了 HLA—DR单克隆抗体，PE—CD29、CD38、CD44、CD105 骨髓MSC所表达的BMI一1和nucleostemin基因。总 和HLA—I单克隆抗体；进行染色体遗传分析及绘制 之，本研究已经成功地分离和鉴定了新的细胞 生长曲线；利用地塞米松、维生素c、B．磷酸甘油、 系——脐带间质干细胞。而这与以前报道过的脐带 bFGF和地塞米松、3一异丁基一1一甲基黄嘌呤、胰岛素、 脉管系统及其周围组织来源的MSC是有很大差异 消炎痛诱导第3代hUCMSC分别向成骨细胞和脂肪 的。hUCMSC具有与骨髓MSC相似的形态学、生物 细胞分化，并通过碱性磷酸酶(ALP)、Von Kossa和 学和遗传学特征。hUCMSC对MSC的多组织来源 油红0染色进行检测；通过PCR，RT—PCR等方法检 的理论作了有益的提示。相对于骨髓MSCs而言， 测相关基因的表达。结果发现hUMSC在培养了2 hUCMSC更易于分离、扩增并且能够更为持续而稳 周后，大多呈纤维状生长，细胞传至第2代时，则为 定地获得数量较多的细胞。hUCMSC是一种新的干 均一的长梭形细胞。在经PKH26和DAPI染色后， 细胞来源，必将在干细胞的临床实验与应用中发挥 可见细胞有一个蓝色的平滑的核，胞浆呈红色，并可 重要作用。 维持20 d左右。hUCMSCs增殖生长迅速，生长潜伏 (全文发表于Cell Biology International，2007、) Separation，purification and biological char