5-aza-dC、TSA联合MeCP2RNA干扰质粒对人肺腺癌细胞株A549生物学行为影响.pdfVIP

摘要 摘 要 目的：探讨DNA甲基化转移酶抑制剂5．氮一27一脱氧胞苷(5-aza．dC)、组蛋白 方法：人肺腺癌细胞株A549细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养。利 构建鉴定，且在mRaNA水平和蛋白水平证明可以明显降低MeCP2蛋白的表达) 转染到A549细胞中。试验分八组：(1)对照组：不给任何处理的A549细胞； (3)实验 (2)实验组l：A549细胞接种24h后，加入5pmol／L的5-aza．dC； 组2：A549细胞接种24h后，加入300nmol／LTSA；(4)实验组3：经稳定转 和300nmol／LTSA；(6)实验组5：稳定转染的A549细胞接种24h后，加入 (7)实验组6：稳定转染的A549细胞接种24h后，加入 5I．tmol／L的5-aza．dC； 300nmol／L TSA。Annexin 的5-aza．dC和300nmol／LV／PI双染法测定各组细胞培养72h后 mRNA的表达。 的凋亡情况；RT．PCR检测各组细胞培养72h后C／EBPa 且两两联合处理组A549细胞凋亡率明显高于单处理组(均PO．01)、三者联 合处理组A549细胞凋亡率高于两两联合处理(均P0．05)，差别有统计学意 基因mRNA的表达，且两两联合处理组A549细胞中C／EBPamRNA的表达水 mRNA 平高于单处理组(均PO．01)、三者联合处理组A549细胞中C／EBPa (4)细胞 的表达水平高于两两联合处理(均P0．05)，差别有统计学意义； C／EBPa mRNA的相对表达量及细胞凋亡率在试验组与对照组组间比较，差异均 有统计学意义(P0．01)； 质粒在诱导细胞凋亡、增强C／EBPamRNA的表达方面比较，差别均无统计学意 义。 摘要 能够更好的增强C／EBPa基因mRNA的表达，诱导人肺腺癌A549细胞凋亡，且三 者联合运用的效果最显著，这将为去甲基化多药联合治疗肺癌提供理论依据。 关键词：曲古抑菌素A；5．氮．27．脱氧胞苷；RNA干扰；C／EBPa：甲基化；A549 细胞 ‘ Abstract ABSTRACT AIM：To theeffectsof inhibitor explore methyltransferase5．aza-2一deoxycytidine inhibitor theRNA (5一aza—dC)，histonedeacetylase trichostatinA(TSA)and interference of Psilencer-2．1一U6-MeCP2 MeCP2on plasmid methyl—bindingprotein behaviorin carcinomaA549cells． biological lung epithelial Methods：Human carcinomaA549cellswereculturedinDMEM epithelial