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鉴别和选择培养基的配制
几种常用鉴别和选择培养基的配制
一、目的要求
了解选择培养基和鉴别培养基的配制原理。
学习和掌握马丁培养基、含氨苄青霉素的LB培养基及伊红美蓝琼脂培养基的配制方法。
二、基本原理
马丁培养基及含氨苄青霉素的LB培养基两者均属选择培养基。马丁培养基常用于从自然环境中分离真菌,培养基中的去氧胆酸钠和链霉素(30 u/m1)不是微生物的营养成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂,不仅防止霉菌菌丝蔓延,还可抑制G+细菌生长,而链霉素对多数G-细菌具抑制生长作用。所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长,而对于真菌的生长则没有影响.从而达到分离真菌的目的。含氨苄青霉素的LB培养基在基因工程研究中常用于筛选具有氨苄青霉素抗性的菌株。培养基中含有一定浓度(100μg/ml培养基)的氨苄青霉素,它能杀死培养基中一切不抗氨苄青霉素的细菌,而只有对氨苄青霉素具有抗性的细菌才能正常生长繁殖,从而达到快速筛选氨苄青霉素抗性菌株的目的。
伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基。常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌。培养基中的伊红为酸性染料,美蓝则为碱性染料。当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时,细菌带正电荷,与伊红染色,再与美蓝结合生成紫黑色化合物。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多,带负电荷,与美蓝结合,被染成蓝色菌落。
三、实验材料
(一)药品
葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O,胰蛋白胨,酵母提取物,NaCl、乳糖、K2HP04 、伊红、美蓝、琼脂等。
(二)溶液
0.1%孟加拉红溶液、链霉素溶液(10000u/m1)、2%去氧胆酸钠溶液、氨苄青霉素溶液(25mg/m1)、2%伊红溶液、0.5%美蓝溶液、1mol/l NaOH、1mol/l HCl溶液等。
(三)仪器
天平、高压蒸汽灭菌锅等。
(四)玻璃器皿
移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
(五)其他物品
药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。
四、实验内容
(一)马丁培养基的配制
1.培养基成分
葡萄糖 1g
蛋白胨 0.5g
KH2P04·3H2O 0.1g
MgSO4·7H2O 0.05g
0.1%孟加拉红溶液 0.33ml
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
2%去氧胆酸钠溶液 2ml(预先灭菌,临用前加入)
链霉素溶液(10000u/m1) 0.33ml(临用前加入)
自然pH
2.配制方法
(1)称量 称取培养基各成分的所需量。
(2)溶化 在烧杯中加入约2/3所需水量,然后依次逐一溶化培养基各成分。按每100ml培养基加入0.33m1的0.1%孟加拉红溶液。
(3)定容 待各成分完全溶化后,补足水量至所需体积。
(4)加琼脂 加入所需琼脂量,加热融化,补足失水。
(5)分装、加塞、包扎。
(6)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(7)临用前,加热融化培养基,候冷至60℃左右,按每100 m1培养基无菌操作加入2m1的2%去氧胆酸钠溶液及0.33m1的链霉素溶液(10000u/m1),迅速混匀。
(二)含氨苄青霉素的LB培养基的配制
1.培养基成分
胰蛋白胨 1g
酵母提取物 0.5g
NaCl 1g
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
氨苄青霉素溶液(25mg/m1) 0.4ml(临用前加入)
pH 7.0
2.配制方
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