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08 年研究生生化与分子生物学试卷（基础篇） 名词解释（每题4分） 基因文库 是整个基因组或某一细胞所表达的基因所有克隆片段的集合体，包括基因组文库和cDNA文库。常用的从基因文库中筛选目标基因的方法：斑点杂交、扣除杂交、免疫化学筛选法、染色体步移和差异显示技术。 荧光定量PCR 通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对结果进行分析,计算待测样品的初始模板量。 酶联受体 细胞表面上的主要类型受体，其细胞质区具有酶活性，或者和细胞质中的酶结合，配体与其结合后，激活酶活性。Domain negative mutation（显性负突变） 一对等位基因中因其中一个突变或丢失所致的另一个正常等位基因的功能活性丧失，都称为显性负突变。在某些肿瘤中，抑癌基因P53的一个等位基因的失活导致另一个正常等位基因也失去活性。 持家基因 管家基因，是指所有细胞中均要表达的一类基因,其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等研究基因组的结构并构建高分辨率的遗传图、物理图、序列图和转录图以及蛋白质组成与结构的学科。 DNA 质粒 噬菌体 腺病毒载体 逆转录病毒载体 写出你所知道的定点突变的方法、名称。 何谓基因表达？基因表达的调控可发生在哪些水平？ 何谓第二信使？简述其基本特征和作用。 为了实际工作需要产生了许多种PCR ，请简述其名称和作用。 不对称PCR 目的：扩增产生特异长度的单链DNA。 方法：采用两种不同浓度的引物。分别称为限制性引物和非限 制性引物,其最佳比例一般是0.01∶0.5μM,关键是限制 性引物的绝对量。 用途：制备核酸序列测定的模板 制备杂交探针 基因组DNA结构功能的研究 2) 反向PCR 用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。 可对未知序列扩增后进行分析,如探索邻接已知DNA片段的序列；用于仅知部分序列的全长cDNA的克隆,扩增基因文库的插入DNA；建立基因组步移文库。 3）多重PCR 用于检测特定基因序列的存在或缺失。 4）LP-PCR 利用同位素、荧光素等对ＰＣＲ引物进行标记,用以直观地检测目的基因。 特别适合大量临床标本的基因诊断 可同时检测多种基因成分 5）锚定PCR PCR的局限：需了解靶基因片段两侧的序列 锚定PCR首先合成第一链cDNA,然后再添加一同聚物尾（polydG),与同聚物尾配对的3’锚定引物（带有限制性内切位点polydC)一起作PCR扩增 5）逆转录PCR 6）原位PCR 原位聚合酶链式反应（In Still PCR,Is－PCR）是由Haase等于1990年首创。它是利用完整的细胞作为一个微小的反应体系来扩增细胞内的目的片段,在不破坏细胞的前提下,利用一些特定的检测手段来检测细胞内的扩增产物。 直接用细胞涂片或石蜡包埋组织切片在单个细胞中进行ＰＣＲ扩增。可进行细胞内定位。 适用于检测病理切片中含量较少的靶序列 既往鉴定细胞内特异序列一般采用原位杂交（ISH）,但在每个细胞中目的片段的拷贝数少于10的情况下,该方法的敏感度就明显下降。而标准的PCR则可扩增出细胞内单拷贝的序列,敏感度很高,但却未能与细胞形态学研究相结合。 ISPCR则可把这两者结合起来,成为细胞学诊断中一种崭新的检测技术。利用该法可检测细胞内病毒感染、细胞内基因重排、以及分析细胞内RNA表达产物等方面发挥一定作用。在检测细胞的潜在感染方面也具有重要意义。 7) 荧光定量 PCR 通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对结果进行分析,计算待测样品的初始模板量。 问答题（5道选3道，每题11分） 基因工程技术与基因调控原理之间的关系。 基因工程的目的是使目的基因能高效表达。 基因表达受 DNA 结构、蛋白质因子与核酸相互辨 认、结合 等组成的表达体系的调控。 基因表达调控可在 转录、转录后修饰、翻译、翻 译后 修饰等水平进行 基因工程载体的构建必需应用 表达调控 的基本理论 知识，应用已知的调控序列进行重组、改造。 病毒的分子生物学特点 包括基本结构和辅助结构，基本结构为核衣壳，由衣壳和病毒核心组成，辅助结构为包膜。其中病毒核心分为核酸，病毒基因组，病毒衣壳为包绕在核酸外面的蛋白质衣壳，衣壳由壳粒组成，而壳粒由多肽分子组成。 为什么拮抗VEGF 能拮抗肿瘤血管生成？请举出拮抗VEGF 的三种生化策略。 因为VEGF通过增强血管的通透性，引起血浆蛋白（主要是纤维蛋白原）的外渗，为肿瘤细胞的生长和新生毛细血