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KAI1及P53在滋养细胞疾病组织中表达摘 要: 目的：研究KAI1和P53在滋养细胞疾病组织中的表达，探讨其在滋养细胞疾病中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学技术检测滋养细胞疾病与正常绒毛组织中KAI1和P53蛋白的表达，并用原位分子杂交技术检测KAI1mRNA的表达和KAI1基因扩增情况。结果：① KAI1和KAI1mRNA在滋养细胞肿瘤组织中的表达低于正常绒毛，二者与患者年龄及浸润程度相关（P＜0.05）。②滋养细胞肿瘤组织中KAI1基因扩增阳性率与正常绒毛比较差异无统计学意义（P＞0.05）。③P53蛋白在滋养细胞肿瘤组织中的表达高于正常绒毛。④P53蛋白和KAI1蛋白表达之间无明显相关(P＞0.05，rs=-0.8)。结论：KAI1和P53与滋养细胞肿瘤的发生、发展有关，可望作为早期诊断、评估肿瘤细胞侵袭转移潜能的指标之一。关键词: 滋养细胞疾病 KAI1 P53 原位杂交 免疫组织化学? 资料与方法? 材料：标本来自1998年5月～2008年3月兰州军区兰州总医院和甘肃省妇幼保健院病理科存档的石蜡包埋组织标本，其正常早孕人工流产绒毛组织20例，滋养细胞肿瘤70例，包括葡萄胎24例，恶性葡萄胎20例，绒癌26例。参照WHO《女性生殖道肿瘤组织学分型(1994)》进行光镜诊断。? 试剂：兔抗人KAI1多抗、鼠抗人P53单抗、过氧化酶标记的链霉卵白素染色试剂盒、DAB显色试剂盒及原位杂交检测试剂盒。? 试验方法：①原位分子杂交：石蜡切片常规脱蜡至水，3% H2O?2室温处理10分钟，滴加0.1NHCl新鲜稀释的胃蛋白酶，37℃消化20分钟。每张切片加20μl地高辛标记KAI1探针，置于95℃烤箱5分钟；37℃杂交过夜。SSC液振洗；TBS液洗涤。加HRP化鼠抗地高辛，3，3 二氨基联苯胺(DAB)显色，充分水洗，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。采用阳性对照DNA探针(Alu)作为阳性对照，阴性对照DNA探针作为阴性对照。②免疫组化：采用SP法进行免疫组化染色。实验中用已知KAI1阳性的前列腺癌标本作KAI1阳性对照，已知胃癌的P53阳性标本作P53阳性对照；PBS代替一抗作为阴性对照。③原位杂交与免疫组化判定标准：原位杂交细胞浆与细胞核内均有阳性信号，有棕黄色颗粒或沉积为阳性染色。根据阳性细胞百分率来判定结果：无杂交信号为（-）；＜25%细胞显色为（+）；25%～50%细胞显色为（++）；＞50%细胞显色为（+++）。免疫组化阳性染色为细胞浆内出现棕黄色颗粒或沉积，同样根据阳性细胞百分率来判定结果。? 统计方法：采用X2检验及Spearman等级相关分析。? 结 果? KAI1蛋白的表达：KAI1蛋白主要表达于细胞浆内。KAI1蛋白在正常绒毛、葡萄胎、恶性葡萄胎、绒癌组织中的表达率分别为70%、58.3%、20%、15.4%。正常绒毛与葡萄胎、恶性葡萄胎与绒癌，差异无显著性（P＞0.05）；正常绒毛与恶性葡萄胎、正常绒毛与绒癌、葡萄胎与恶性葡萄胎、葡萄胎与绒癌，差异有显著性（P＜0.05）。? KAI1基因扩增情况：KAI1基因扩增主要见于核内，正常绒毛中为核内散在棕黄色小颗粒状沉淀物；葡萄胎组织中稍有增强，大多为核内局灶阳性颗粒；滋养细胞肿瘤组织中表现为大片的棕黄色粗颗粒，尤其是在绒癌组织中扩增更加显著。KAI1基因扩增阳性率在正常绒毛、葡萄胎、恶性葡萄胎、绒癌组织中的表达率分别为10%、12.5%、20%、26.9%。正常绒毛与滋养细胞肿瘤组织比较差异无显著性（P＞0.05）。? KAI1mRNA的表达：KAI1mRNA主要表达于细胞浆内。KAI1mRNA在正常绒毛、葡萄胎、恶性葡萄胎、绒癌组织中的表达率分别为85%、87.5%、45%、30.8%。正常绒毛与葡萄胎、恶性葡萄胎与绒癌，差异无显著性（P＞0.05）；正常绒毛与恶性葡萄胎、正常绒毛与绒癌、葡萄胎与恶性葡萄胎、葡萄胎与绒癌，差异均有显著性（P＜0.05）。? P53蛋白的表达：P53蛋白主要表达于细胞核内。P53蛋白在正常绒毛、葡萄胎、恶性葡萄胎、绒癌组织中的表达率分别为10%、33.3%、70%、69.2%，正常绒毛与滋养细胞肿瘤组织比较差异显著（P＜0.05）。? 滋养细胞肿瘤组织中KAI1与P53蛋白表达的相关关系：应用Spearman等级相关分析显示，KAI1与 P53在滋养细胞肿瘤中的表达差异无显著性（P=0.2，rs=-0.8），二者在滋养细胞肿瘤中的表达无相关性。? 讨 论? KAI1与滋养细胞疾病：研究发现多种转移性肿瘤伴随有KAI1基因表达的下降或缺失［1］，如前列腺癌、肺癌、胰腺癌等。本研究结果显示KAI1蛋白和KAI1mRNA在滋养