养阴清热方对615小鼠HCa―F肝癌凋亡相关蛋白Bcl―2 BaX表达影响.doc

养阴清热方对615小鼠HCa―F肝癌凋亡相关蛋白Bcl―2 BaX表达影响摘要：目的：探讨复方中药抗肿瘤的机制及作用靶点。方法：造模后，荷瘤鼠随机分成6组，分别给生理盐水(空白组)、养阴清热方一安体优I号低(ATu―L)、中(ATU―M)、高(ATU―H)3个剂量组灌胃、及阳性对照d―IFN和紫杉醇(PTX)组治疗，第21天处死动物，制备相应标本，以免疫组化SABC法测定瘤组织凋亡相关蛋白Bd-2、Bax的表达情况。结果：A1U―H组可下调Bd一2、上调Bax的表达，与空白组及ATU-L组比较，均有显著差异(均P0.05)；而ATU―L的作用不明显，与空白组差另q不大(P0.05)。结论：安体优I号可部分下调615小鼠HCa―F肝癌的凋亡相关蛋白Bcl一2的表达、并上调Bax的表达。 关键词：中医药疗法；细胞凋亡；Bcl-2；Bax 中图分类号：It289.5 文献标识码：A 文章编号：1673―7717(200r7)11―2327―03 细胞凋亡(Apoptosis)，亦称程序性细胞死亡，不仅对胚胎发生、个体发育和保持机体稳定等生物学功能至关重要，而且在调控细胞增殖、肿瘤形成和发展中也起关键作用。凋亡过程的紊乱将导致发育异常，并加速肿瘤的发生与恶化。研究表明，几乎所有的化疗药物均可通过诱导凋亡而发挥作用，因此，诱导肿瘤细胞凋亡是众多肿瘤治疗方法(如放、化疗，生物治疗等)的重要药理学机制和生物学效应之一。中医中药治疗肿瘤已有几千年的历史，具有独特的优势，临床上，复方中药养阴清热方一安体优I号治疗肝癌等肿瘤，取得较好疗效。本研究试图从中药对HCa―F肝癌荷瘤小鼠的干预作用，模拟中药体内给药途径，探索复方中药抗肿瘤的机制及作用靶点。 1　材料与方法 1.1　瘤株及实验动物 肝癌高淋巴道转移细胞系HCa―F，购自大连医科大学病理教研室；近交系615小鼠(三级)48只，雌雄各半，体重(20±2)g，购自中国医学科学院实验动物中心。在SPF环境饲养，按文献复制模型，无菌条件下抽取荷有HCa―F肝癌的615小鼠癌性腹水，配制成含HCa―F肝癌细胞2×106浓度，活细胞95％以上，再以每只0.2mL细胞悬液接种于615小鼠右腋皮下。 1.2　药物 养阴清热方――安体优1号(北沙参、天门冬、三叶青、南方红豆杉等8味)，简称ATU―I，生药材经水提取(不含南方红豆杉)，浓缩分装；南方红豆杉以70％乙醇回流提取，按比例加入中药煎液中，分别简称为养阴清热方低、中、高剂量组，储于4℃冰箱，临用时振荡浑匀。a―IFN(赛若金注射液，500万U／瓶)，深圳科兴生物制品有限公司，(96)卫药准字(圳科兴)S-02号，批号030401。紫杉醇针剂(PTX,5mL／30mg瓶)，北京四环医药科技股份有限公司，(98)卫药准字x-10号，批号021009。 1.3　分组及给药方法移植24h后，随机分为6组，每组样本为8只，分别为空白组(blank组)、阳性药物1组(干扰素组，简称IFN组)、阳性药物2组(紫杉醇组，简称PTX组)、中药养阴清热方低剂量组(简称ATU-L组)、养阴清热方中剂量组(简称ATU―M组)、养阴清热方高剂量组(简称ATU―H组)。在接种24h后开始给药，养阴清热方低、中、高3个剂量组每天每只分别予约0.4mL／日灌胃，连续21天；阳性药物1组每只给予a―IFN1×106U／kgd，左腋皮下注射，每天1次，共用21次；空白组每只给0.4mL生理盐才(／日灌胃，共21天；阳性药物2组(PTX组)，参考有关文献报道，在接种24h后给予1次腹腔注射0.2mL／只紫杉醇(0.4mg／20g)；空白组每只给生理盐水0.4mL／日灌胃，连续21天。 1.4　取材 在第22天，用眼球放血法处死全部小鼠，剪开右腋下皮肤，分离出移植瘤组织：取瘸块边缘生长良好的瘤组织，大小约0.4cm×0.3cm×0.2cm，置于10％福尔马林中固定，以备石蜡包埋待用。将待检肿瘤组织用10％甲醛固定一酒精脱水→二，甲苯透明→常规石蜡包埋、常规组织腊块4μm连续切片，贴附于防脱片剂APES处理的洁净载玻片，置于60℃烤箱烤干备用。 1.5　试剂与实验方法 即用型SABC免疫组化染色试剂盒(含5％山羊血清封闭液，二抗，SABC等)购自武汉博士德试剂公司，其中―抗bel-2为兔抗鼠多抗，Cat#，554087、bax为兔抗鼠多抗，Cat#554106，均为美国BD公司产品，采用SABC法进行免疫组化染色。 1.6　统计学处理 采用SPSS12.0软件包统计，率的比较用x2检验，当n0.05。ATU-M组bcl-2的高表达率较空白组及ATU-L组有所降低，但差异不显著，均P0.05。而其它各