刺五加皂苷对血管内皮生长因子表达抑制作用.doc

刺五加皂苷对血管内皮生长因子表达抑制作用摘 要：目的：检测刺五加皂苷(ASS)对血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法：以人肝癌细胞株(Hep G2)为研究对象，采用RT-PCR法测定刺五加皂苷(ASS)对VEGF mRNA表达的影响。结果：刺五加皂苷(ASS)250、500μg/mL作用于Hep G2细胞株，VEGF mRNA表达量下降(P0.01)。结论：一定剂量刺五加皂苷(ASS)抑制Hep G2细胞株的VEGF mRNA表达量，提示刺五加皂苷(ASS)可以抑制VEGF介导的肿瘤血管新生途径，进而抑制肿瘤的生长与转移。 关键词：刺五加皂苷；肝癌细胞株；血管内皮生长因子；RT-PCR 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)03-0661-02 The Effect of Acantbepanax Senticosus Spaponin On The Expression of VEGF mRNA FENG Jun-dong1，LIN Dai-hua2 (1.Medical Physics Department，Nanjing University of Aeronautics Astronautics，Nanjing 210019，Jiangsu，China； 2.College of TCM，Chongqing Medical University，Chongqing 400050，China) Abstract：Objective：To investigate the effect of Acanthopanax senticosus spaponin (ASS) on the mRNA expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in human Hep G2，in order to study the mechanism of ASS on anti-angiogenesis. Methods：Hep G2 were incubated with ASS，the expression of VEGF mRNA was detected by RT-PCR assay. Results：ASS(250，500μg/mL) decreased the expression of VEGF mRNA (P0.01). Conclusion：ASS might inhibit angiogenesis by decreasing VEGF mRNA. Keywords：Acanthopanax senticosus spaponin (ASS)；Hep G2；VEGF；RT-PCR； 刺五加有扶正固本、养血安神、滋补强壮之功能，是治疗体虚、咳嗽、高血压、神经衰弱等症的良药。现代医学研究证实刺五加具有增强机体免疫能力、抗肿瘤、抗辐射、抗应激、抗疲劳等作用。古代曾有“宁要五加一把，不要金玉满车”之说，对刺五加给予高度评价。刺五加皂苷(ASS)是刺五加的主要活性成分，具有多种药理作用。Yoon[1]等发现ASS具有抗肿瘤活性并抑制肿瘤的转移。有关实验证实刺五加皂苷(ASS)能够抑制小鼠肝癌移植瘤的生长与转移[2]，其机制尚不清楚。本实验探讨其作用机制是否与血管内皮生长因子(VEGF)表达有关。VEGF是最重要的促血管生成因子之一[3]，与肿瘤血管新生密切相关，在肿瘤的生长、转移、治疗中具有非常重要的作用。本实验以人肝癌细胞株(Hep G2)为研究对象，采用RT-PCR法测定刺五加皂苷(ASS)对VEGF mRNA表达的影响。 1材料 人肝癌细胞株Hep G2，购自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库。RPMI 1640培养液，美国Hyclone公司；PCR引物由北京中山生物技术有限公司合成；刺五加皂苷(ASS)，陕西天润植物化工有限公司。 2方法 2.1人肝癌细胞株Hep G2的培养 Hep G2常规培养于10%RPMI1640培养液中，培养条件为37℃，饱和湿度，5%CO2，每2～3天用0.25%胰酶消化传代。 2.2逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测VEGF mRNA表达 2.2.1 实验分组刺五加皂苷(ASS)250、500μg/mL组；阴性对照组：不加处理因素。 2.2.2 RNA提取和鉴定按实验分组加入刺激因素培养48h；加入TRIzol Reagent裂解细胞，室温下干燥RNA沉淀；RNA沉淀溶于20μL Nuclease-Free水中，取上述溶液1μL RNA液加入99μL