加味小柴胡颗粒及其组方对ITP模型小鼠造血系统影响.doc

加味小柴胡颗粒及其组方对ITP模型小鼠造血系统影响摘要：目的：观察加味小柴胡颗粒及其组方对免疫性血小板减少性紫癜(rrP)模型小鼠血小板计数及骨髓巨核细胞的影响。方法：建立ITP模型小鼠，将之分为7组：正常组、模型组、强的松组、加味小柴胡颗粒组、小柴胡颗粒组、丹参三七颗粒组。于造模后第14天开始分组给药，给药体积为30ml／kg体重，每日给药1次，共14天，分别于给药前后称重；给药前、给药后4天、7天及14天检测血小板计数；实验结束剥离股骨取骨髓测巨核细胞计数和分类。结果：ITP模型小鼠体重增长率下降，血小板计数持续下降，骨髓巨核细胞增加，产板巨减少、成熟度下降，有统计学意义(P0.05)；强的松组、加味小柴胡颗粒、小柴胡颗粒组使巨核细胞数减少，产板巨增高，其中加味小柴胡颗粒组优于小柴胡颗粒组，有统计学意义(P0.05)。结论：加味小柴胡颗粒能提高ITP模型小鼠体重增长率，并明显提升血小板计数，促使骨髓巨核成熟，效果优于雏血宁组，且优于其组方小柴胡颗粒和丹参三七颗粒，与强的松组疗效相似。 关键词：小柴胡颗粒；丹参三七颗粒；ITP；动物模型 中图分类号：R285.5 文献标识码：A　文章编号：1673―7717(2008)01－0106―03 1　实验材料 1.1　实验动物BALB／C小鼠，体重18－22g，SPF级，雌雄各半。由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。实验动物生产许可证：SCXK(沪)2003―0003。动物生产许可证：实验动物使用许可证：SYXK(苏)2002－0123。 1.2　药品小柴胡颗粒处方按《伤寒论》小柴胡汤，主要成份柴胡、黄芩、法半夏、党参、炙甘草、生姜、大枣，每100g颗粒含生药545g；丹参三七颗粒：每100g颗粒含生药200g；加味小柴胡颗粒：处方按《伤寒论》小柴胡汤加丹参、三七，每100g颗粒含生药418g；以上均由天江制药厂提供；维血宁颗粒：8g，包，无糖型，主要成份熟地黄、地黄、墨旱莲、白芍(炒)、太子参、仙鹤草、鸡血藤、虎杖，江苏天士力制药有限公司生产(批号0512029)；醋酸泼尼松片：5mg／片，浙江仙居制药有限公司(批号040633)。 1.3　试剂　柠檬酸(C6H802H：O)，合肥工业大学化学试剂厂，批号磷酸二氢钠，南京化学试剂厂，批号030512。枸橼酸三钠(双结晶水)，合肥工业大学化学试剂厂，批号ACD溶液，由含双结晶水的枸橼酸三钠2.2g、枸橼酸O.8g和葡萄糖2.5g，加水至100mL制成。 1.4　仪器COULTER AC.T Series Analyzer血细胞计数仪，BECKMAN COULTER公司产品；MELLTER－AE240电子天平，梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司产品；MPl2001电子天平，上海市恒平科学仪器有限公司生产；DK－型电热恒温水槽，上海精宏实验设备有限公司产品；LDZ5－2型低速自动平衡离心机，北京医用离心机厂产品。 2　实验方法 2.1　豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)制备采集小鼠全血于ACD液中(6：1，pH4.5)，离心分离血小板，然后用0.01M，pH7.4的PBS液洗涤3次并混悬血小板，向每只豚鼠经腹腔注射血小板10致敏。隔1个月如前法进行第2次注射。在第2次注射后第6天，经腹主动脉穿刺采血，取血清，并用洗涤过小鼠红细胞(1：1)及洗涤过的小鼠淋巴细胞(1：1)各吸附2次，分离血清，分装后贮存在冰箱中备用。抗血清活性的测定(ELISA法)：将豚鼠全血抗凝于ACD液中，分离血小板，用0.01M pH7.4的PBS洗涤3次，将血小板调至一定浓度加入40孔反应板，每孔0.1mL，4℃冰箱过夜。反应板洗涤3次后，分别加入1：2、1：4、1：8、1：16、1：32等浓度的抗血清O.1mL，放入37℃温箱孵育1h，以0.01M，pH 7.4的PBS洗涤3次分别再加入适当浓度的酶联葡萄球菌A蛋白，放入37℃温箱1h，再37℃温箱反应30mln，加入2Mh2so4终止反应，用酶标比色计测定OD值，若大于对照2倍OD值为阳性。 2.2　1TP模型建立参照文献方法，采用注射豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)建立小鼠免疫性血小板减少性紫癜模型，按照100g,L／10g体重于腹腔注入1：4稀释的抗血清。造模第6h，血小板开始下降，到8h降至最低。分别于第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19天注射抗血清以维持血小板持续在低水平。 2.3　分组给药于造模后第7天开始分组给药。小鼠共分为7个组，即：(1)正常组：给予等体积蒸馏水。(2)模型组：给予等体积蒸馏水。(3)维血宁组：给予维血宁4.4g/kg体重。(4)强的松组：给予强的松11