单核细胞趋化蛋白1在牙髓中免疫组化探究.doc

单核细胞趋化蛋白1在牙髓中免疫组化探究摘要 目的：探讨单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）在牙髓炎发生、发展中的作用机理，为揭示MCP-1对牙髓炎性疾病发生、发展的作用提供依据。方法：采用免疫组织化学方法检测正常人及急、慢性牙髓炎患者牙髓组织中MCP-1的表达。结果：MCP-1在正常牙髓组织中无表达，在炎症组织中有不同程度的表达。? 关键词 单核细胞趋化蛋白1 牙髓炎 免疫组化? 资料与方法? 检测标本来自长春市口腔医院2004年3～9月口腔内科门诊患者，急、慢性牙髓炎各20例，健康牙髓20例（烤瓷牙需要拔髓者），患者年龄18～50岁,所有患者2个月内无服用免疫抑制剂及抗菌药物史,均未做过牙髓治疗。? 标本处理：标本用10%中性福尔马林浸泡，常规脱水，石蜡包埋，制备4～5μm厚切片，分别作HE染色和免疫组化染色。HE染色结果作为病理学分组标准，进一步区分各组标本。? 主要试剂、仪器：MCP-1单克隆抗体（TBD公司），SABC显色试剂盒（武汉博士德公司），S-P超敏试剂盒（迈新生物）。? 免疫组化染色步骤：石蜡切片常规脱蜡水化，PBS冲洗3分钟×3次，高温加热修复抗原（加热至95℃关火，室温放置自然冷却，蒸馏水冲洗3次，PBS浸泡5分钟）；PBS冲洗3分钟×3次；滴加过氧化酶阻断溶液（试剂A）室温下孵育15分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性；PBS冲洗3分钟×3次；滴加正常非免疫动物血清（试剂B），室温下孵育10分钟；除去血清，滴加第一抗体（稀释浓度1∶[KG-*2]50），4℃过夜。PBS冲洗3分钟×3次；滴加生物素标记的第二抗体（试剂C），室温孵育10分钟，PBS冲洗3分钟×3次；滴加链霉素抗生物素-过氧化物酶溶液（试剂D），室温孵育10分钟，PBS冲洗3分钟×3次；DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染，梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。阴性对照采用PBS代替一抗,其余步骤相同。? 结果? 免疫染色结果显示，在健康牙髓组织中未见明显的MCP-1表达阳性细胞，在急慢性牙髓组织中MCP-1有不同程度的阳性表达，阳性染色细胞数量不均，阳性染色程度不一致，阳性表达为分布于细胞浆呈棕黄色的颗粒状物。表达MCP-1的细胞主要是单核/巨噬细胞和血管内皮细胞,中性粒细胞，成纤维细胞。在慢性炎症牙髓组织中还可观察到新生的毛细血管上有MCP-1表达阳性细胞。急、慢性组阳性表达无统计学差异。? 讨论? MCP-1在炎症性疾病中的作用：大量的炎性疾病中都发现了MCP-1的存在,与单核/巨噬细胞免疫作用有关的疾病大多有MCP-1的参与。? 首先，MCP-1对单核/巨噬细胞具有激活和趋化的双重作用。实验证明MCP-1促使嗜碱性粒细胞释放组胺的速度相当快，能在1小时内达到最高水平。MCP-1在炎症反应时与单核/巨噬细胞、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞的激活有关联，在免疫应答中起重要作用，具有促炎的作用。? 其次，由于MCP-1的缺失可以导致IL-4、IL-5、IL-10分泌受抑制，从而导致Th2型免疫反应受抑制，MCP-1在Th2型细胞因子的定位方面具有重要作用，促进巨噬细胞选择性激活途径的抗炎过程，是Th2型免疫应答必不可少的重要因素［1］。而正是Th1细胞向Th2细胞的不断转化导致巨噬细胞选择性激活，抑制经典激活的巨噬细胞的抗原提呈作用和促炎因子的分泌，并通过分泌血管生成因子和成纤维因子促进组织的愈合，从而避免炎症反应过度对组织造成的损害。这证明MCP-1还有抗炎的作用。? MCP-1在炎症牙髓中表达的意义：在本实验中观察到，急、慢性牙髓炎症组织中存在MCP-1阳性表达，正常牙髓组织中没有表达，这证明MCP-1作为一种诱导性表达趋化因子，在牙髓炎中存在的内毒素、细菌释放的各种酶、代谢产物、炎症介质及其他损伤因子的刺激和诱导下上调表达，参与了牙髓炎症反应。由于 MCP-1对单核/巨噬细胞的强烈趋化作用，MCP-1在炎症牙髓中的表达为炎症区单核/巨噬细胞的存在提供了机制性解释，同时趋化的单核/巨噬细胞再度表达MCP-1能够再趋化和激活更多的单核/巨噬细胞到炎症部位，在炎症反应中起到一种级联放大的作用。实验中观察到，慢性牙髓炎组织中MCP-1的表达比急性组略有增高，同时慢性组的单核/巨噬细胞数量也比急性组高，这说明MCP-1是单核/巨噬细胞持续趋化的主要动力。? 在慢性炎症组织中观察到，除一些炎症细胞表达MCP-1外，血管内皮细胞和成纤维细胞也表达MCP-1，并且在新生的毛细血管上有MCP-1阳性表达，这说明MCP-1参与了慢性炎症的恢复过程。MCP-1在血管内皮细胞中的表达，提示MCP-1有助于单核细胞穿越血管内皮细胞，到达炎症部位。MCP-1可以调节单核细胞表面特异性黏附分子