复方地黄对AD大鼠学习记忆及海马CA1区神经元突触超微结构改变实验探究.docVIP

复方地黄对AD大鼠学习记忆及海马CA1区神经元突触超微结构改变实验探究摘　要：目的：探讨“益肾健脾、祛痰清瘀”法应用复方地黄对老年性痴呆(AD)模型大鼠行为学的改善作用及对AD大鼠海马CA1区神经元突触超微结构改变的影响。方法：在腹腔注射D－半乳糖造成大鼠衰老的基础上。海马注射喹啉酸(QA)造成拟老年性痴呆学习记忆损害模型，灌胃复方地黄水溶液，观察Morris水迷宫检测大鼠学习记忆水平及突触超微结构的变化。结果：大鼠跳台筛选模型，统计复方地黄对老年性痴呆大鼠学习记忆和海马神经元突触超微结构的影响。结论：复方地黄可明显提高和增强AD老大鼠学习记忆水平，保护神经元突触超微结构。 关键词：阿尔次海默病；复方地黄；学习记忆；突触 中图分类号：R285.5　文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1482－02 随着社会人口老龄化，老年性痴呆(Alzheimer’s dis-ease，AD)的患病率逐年增高。探寻老年性痴呆发生的确切病理机制及有效防治药物，成为整个医学界的重要课题。中医中药强调整体统一和平衡，AD是一种多因素相关的复杂病症，它是一种以临床和病理神经退行性变为特征的神经病，海马神经元突触超微结构的改变是老年性痴呆学习记忆能力减退的一个重要原因，为此，本实验从观察复方地黄对衰老大鼠学习过程及记忆效果的影响和突触超微结构改变人手，探讨复方地黄对老年性痴呆大鼠的防治作用，为临床治疗AD提供理论依据。 1　材料和方法 1．1分组与造模取雄性Wistar大鼠55只，按体重均衡随机分4组，分别为空白组、模型组、保护组、治疗组。空白组10只动物，其余组均为15只。除空白组外。其余各组均给予D－半乳糖50mg/(kgd)腹腔注射，连续8周。行为学测试后，除空白组外均行脑内注射，脑立体定位仪下于前囟AP0.2mm、ML2.5mm、DV7.5mm，注射1μL液体(喹啉酸QA：浓度75nmol/μL Sigma公司提供)于海马CA1区，垂直进针，注射5min，留针5min。保护组在腹腔注射同时给复方地黄，术后3周，行为学测试成功后用药治疗。治疗组每天给予复方地黄液(齐齐哈尔医学院药物研究所提供)灌胃2mL/只，含药量50％，空白组、模型组常水2mL/只灌胃。连续给药9周(包括行为学测试的1周)。 1．2　Morris水迷宫检测大鼠学习记忆行为用药8周后。将每只大鼠头颈部毛发用普通染发剂涂黑，进行定位航行实验，连续5天，以第4天的潜伏期(SPL，大鼠从入水点开始找到平台的时间)、诱导次数(大鼠若2min内找不到安全平台，则由实验者将其放回安全平台)、运动路径等指标，作为定位航行学习成绩。第7天进行空间探索实验(即除去安全平台观察大鼠2min内在平台象限的游泳路程与总路程之比)以检测大鼠空间记忆能力。每次均4组平行进行。 1．3电镜标本制备1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠。剖开动物腹腔暴露心脏，在心尖部用12号针头从左心室剪开小口处穿入主动脉，同时右心耳剪小口放血，生理盐水冲洗，然后4％多聚甲醛加2.5％戊二醛灌注固定。断头取脑，制成超薄切片。透射电镜观察摄片(哈尔滨医科大学)。 1．4统计学处理所有数据均以x±s表示，用统计软件SPSS10.0处理，进行方差分析和成组t检验，显著水平a=0.05。 2　结　果 2．1 复方地黄对AD大鼠学习记忆过程的影响(定位航行试验)成组t检验结果见表1。治疗组比模型组潜伏期减少，航行路径缩短，诱导次数减少，诱导百分比降低(χ2检验。P＜0.05)。 2．2　复方地黄对AD大鼠记忆强度的影响(空间探索试验)成组t检验结果见表2。模型组大鼠游泳路线各象限几乎平均，仍较盲目搜索安全平台，只是偶尔跨越安全平台位置；治疗组大鼠有较明确的搜索目的，游泳路线主要集中在安全平台象限，跨越安全平台位置次数明显多于模型组。 2．3　AD大鼠海马CA1区神经元突触超微结构改变，见表3。 3　讨　论 D－半乳糖拟衰老模型可以成功地观察到类似衰老的多个组织器官功能变化，被公认是当前衰老的较好的模型。喹啉酸(Quinolinic acid，QA)，为谷氨酸(Giu)类似物，是脑内潜在的内源性毒素。海马是对QA神经毒性最敏感脑区，过量的QA激活其CA1区的N－甲基－D天门冬氨酸(NMDA)受体，不仅兴奋神经细胞使突触后去极化，同时又可刺激Glu的释放，形成恶性循环。Glu受体具有不易脱敏的性质，大量的Glu往往引起细胞去极化和过度兴奋。NMDA受体激活不仅引起Na+内流，而且引起Ca2+内流，Na+内流可致细胞肿胀，引起细胞急性坏死，Ca2+在细胞内积聚可激活磷脂酶和蛋白酶，使神经元趋于改变。因海马CA1大量Glu能神经元肿胀坏死