大黄(庶-虫)虫合剂对小鼠T细胞亚群影响实验探究.docVIP

大黄(庶/虫)虫合剂对小鼠T细胞亚群影响实验探究摘　要：目的：通过检测黄(庶/虫)虫合剂对实验性免疫低下小鼠及正常小鼠脾脏T细胞亚群的影响。探讨该合剂对免疫功能的调节作用。方法：选取昆明种小鼠100只，雌雄各半。其中50只腹腔注射环磷酰胺1.6mg/0.2mL/只，每天给药1次，连续3天，造成免疫低下小鼠，然后随机分为模型组、中药对照组(六味地黄组)、西药对照组(卡介菌多糖组)、小剂量组、大剂量组；其余50只随机分为正常空白对照组(即生理盐水组)、中药对照组、西药对照组、小剂量组、大剂量组。上述各组连续用药3天后，处死小鼠摘取脾脏，用免疫组化的检测T细胞亚群含量。结果：大黄(庶/虫)虫合剂能显著提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠CD+4、CD+8的百分率及CD+4、CD+8比值(统计学处理P＜0.05)。结论：大黄(庶/虫)虫合荆可通过增强小鼠T淋巴细胞的免疫水平。有效地提高集体的免疫功能。 关键词：大黄廑虫舍荆；环磷酰胺；免疫调节；T细胞亚群 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1406－02 大黄(庶/虫)虫合剂以仲景名方大黄(庶/虫)虫丸为基础方由大黄、干地黄、(庶/虫)虫、甘草、桃仁等药物组成。具有活血化瘀、缓中补虚之效。临床多用于治疗乙肝、肝硬化、肿瘤等免疫失调性疾病，疗效确凿。但相关的免疫作用机理却少有研究。本实验主要通过观察大黄(庶/虫)虫合剂对小鼠T细胞亚群的影响，探讨其免疫作用机制，为临床治疗提供科学数据。 1　材料与方法 1．1 实验材料 1．1．1　实验动物昆明种小鼠100只，体重为(20±2)g，雌雄各半。 1．1．2　实验药物大黄(庶/虫)虫合剂(将本方药物浸提、净化、浓缩、制成合剂，每瓶100mL。由山西中医学院附属医院制剂室提供)；六味地黄丸(北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂提供，批号为粉碎研磨后，经100目过筛制成散剂)；卡介菌多糖核酸注射液(湖南九芝堂斯奇生物制药有限公司，批号为；环磷酰胺(江苏恒瑞医药有限公司提供，批号为403501)。 1．1．3 实验试剂　CD4、CD免疫组化试剂盒(上海森雄 1．1．4　实验仪器IL－4012－1型回转式切片机(由浙江金华无线电厂提供)；CS－V工型摊片烤片机(由孝感市宏业医用仪器有限公司提供)。 1．2　实验方法 1．2．1　试剂配制大黄(庶/虫)虫合剂灌胃液的制备：取大黄(庶/虫)虫合剂加蒸馏水溶解，分别配制成实验所需的低浓度92mg/0.4mL和高浓度368mg/0.4mL溶液。六味地黄灌胃液的制备：取六味地黄丸粉碎后加蒸馏水溶解，配制成浓度为63mg/0.4mL的溶液。卡介菌多糖注射液的制备：将卡介菌多糖配成浓度为0.125mg/0.2mL。环磷酰胺注射液的制备：将环磷酰胺加生理盐水配制成浓度为1.6mg/0.2mL的溶液。 1．2．2　分组及给药将100只小鼠，随机分成两大组：正常实验组和免疫功能低下组，各50只，正常组再随机分成5组(具体剂量参考陈奇主编的《中药药理实验方法学》按体表面积折算方法进行计算：生理盐水组：腹腔注射生理盐水0.4mL/只；中药对照组：六味地黄丸水溶液灌胃63mg/(0.4mL)；西药对照组：腹腔注射卡介菌多糖0.125mg/(0.2mL)；小剂量组：低浓度大黄(庶/虫)虫合剂灌胃92mg/(0.4mL)；大剂量组：高浓度大黄(庶/虫)虫合剂灌胃368mg/(0．4mL)。免疫功能低下组小鼠腹腔注射环磷酰胺每只1.6mg/0.2mL，1次/天，连续3天。然后再随机分成5组，其中1组作为环磷酰胺对照组，其余4组分别为环+中药对照组、环+西药对照组、环+小剂量组、环+大剂量组，给药同上述方法，1次/天，连续3天。 1．3　检测项目与方法 最后1次给药24h后，摘眼球处死小鼠，将取出的脾脏固定于10％的多聚甲醛液中6－8h，经酒精梯度脱水后进行石蜡包埋，在IL－4012－t型回转式切片机上将组织切成厚度为4μm的薄片，置于CS－VI型摊片烤片机上，将均匀摊片后的组织载于玻片上，静置2min，放于37℃的烤片机内令其干燥，用免疫组化的方法进行T细胞亚群的测定。显微镜下计数200个细胞，计算阳性细胞(细胞膜着色呈棕黄色)的百分率。 1．4　统计学方法 所有实验数据均以x±s表示，组间检验采用t检验。 2　结　果 2．1 大黄(庶/虫)虫合剂对正常小鼠T细胞亚群的影响 从表1可以看出，中药对照组、西药对照组、实验药物的大小剂量组CD+4、CD+4/CD+8比值均高于生理盐水组(P＜0.05，P＜0.01)具有统计学意义；实验药物