大鼠乳腺癌癌前病变肝郁证造模探究.docVIP

大鼠乳腺癌癌前病变肝郁证造模探究摘 要:目的:通过大鼠乳腺癌癌前病变结合肝郁证造模研究,观察大鼠在癌前病变病证结合造模阶段生物学行为、激素水平、组织病理学的改变,探讨成模规律,健全造模评价指标。方法:实验大鼠随机分为空白对照组、二甲基苯蒽造模组、雌二醇造模组、二甲基苯蒽加夹尾造模组、雌二醇加夹尾造模组,采用二甲基苯蒽灌胃复制乳腺癌癌前病变大鼠模型,苯甲酸雌二醇和黄体酮肌注复制乳腺增生大鼠模型,夹尾激惹法复制肝郁证模型。观察各时期大鼠一般情况、5-羟色胺检测、组织病理学的改变。结果:①病证结合造模两组大鼠与单纯疾病造模两组大鼠比较,一般行为更符合肝郁证特点(P0.05),但均明显高于雌二醇造模组和雌二醇加夹尾造模组(P0.05)in the rate of breast precancerous and canner occurrence, but higher than the estrone group and the estrone folder tail group(P0?01).Conclusion:It is an successful method to induce animal pattern of the depression of the liver type breast precancerous by gavage method and jire law. Performance of general conduct neuroendocrine are anastomosis with clinical features of stagnation of the liver type. Key words:breast precancer;depression syndrome of the liver;DMBA;Jire law;animal pattern 乳腺癌是一种严重威胁广大妇女健康和生命的恶性肿瘤,其发病率已跃居女性恶性肿瘤中的首位。为了解乳腺癌前病变特点,寻找乳腺癌前病变有效的中西医诊疗方案,国内外学者进行了大量基础与临床实验研究[1-2],20世纪末,人们对乳腺癌发生的机制提出了“多阶段发展模式”的假说,即“正常→增生→非典型增生→原位癌→浸润性癌”的发展模式[3],并且认为在发展成为浸润性癌之前是可逆的。这种多阶段发展模式为人们采取各项措施阻断、逆转癌前的各个发展阶段,降低乳腺癌发生率提供了理论基础。大力加强乳腺癌癌前病变的基础实验研究,对预防乳腺癌的发生、明确乳腺癌癌变机制、探索有效治疗方法具有极其重要的意义。本实验通过大鼠乳腺癌癌前病变肝郁证动物造模研究,规范癌前病变病证结合造模操作方法,观察此阶段大鼠生物学特性,建立病证结合造模有效指标,填补乳腺癌癌前病变中西医结合实验研究领域的空白。 1材料与方法 1.1 实验动物 SPF级SD雌性大鼠50只,体重(200±20)g,山东大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(鲁常规方法饲养1周,适应环境后开始实验。 1.2 实验试剂 二甲基苯蒽(Sigma公司生产,产品编号D3254-5G,087K1196),5g/支,溶于500mL芝麻油备用;苯甲酸雌二醇注射液(上海通用药业股份有限公司,批号040304),浓度2mg/支;黄体酮(浙江仙琚制药股份有限公司,批号040620),浓度10mg/支;血清5-羟色胺测定药盒(济南联兴生物科技有限公司);脱毛膏、甲醛,水合氯醛、乙醇、二甲苯、苏木素、伊红等。 1.3 实验仪器 OLYMPUS(BH-2)照像显微镜、光学显微镜、Leize切片机、精密游标卡尺、止血钳、恒温箱等。 1.4 动物分组及造模方法 (1)造模方法: 乳腺癌癌前病变的模型制造:参照宋爱莉等[4-5]方法,实验第1天用溶解有二甲基苯蒽(DMBA)的芝麻油,按1mL/100g比例给大鼠灌胃。 乳腺增生病的模型制造:参照饶金才等[6]方法,大鼠后腿内侧肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5mg#8226;kg-1#8226;d-1,连续25天,然后肌注黄体酮4mg#8226;kg-1#8226;d-1,连续5天,制造乳腺增生病动物模型。 肝郁证的模型制造:实验第4周开始,限制大鼠活动范围,用前头缠厚纱布的止血钳随机夹病证结合造模组大鼠的尾巴,使其保持激怒状态,尖叫、互相追咬,每天夹尾激惹45min,连续4周。 (2)分组及给药方法: SPF级未孕成年SD大鼠50只,按随机数字表随机分为5组,每组10只,分别编号,称重,造模如下。 空白对照组:10只,芝麻油2mL灌胃1次,大鼠后腿内侧肌肉注射注射生理盐水0.2mL/