宁夏海原县马铃薯脱毒苗切段扩繁技术要点.docVIP

宁夏海原县马铃薯脱毒苗切段扩繁技术要点[摘 要] 海原县作为宁夏区内马铃薯生产大县，每年繁育马铃薯原原种2000万粒以上，这主要是经过多年的马铃薯试管苗切段快繁技术试验，成功培养了更多的脱毒马铃薯种苗，从而使脱毒马铃薯种薯源源不断地应用于生产当中。 [关键词] 马铃薯；种苗；扩繁技术 马铃薯脱毒试管苗的工厂化生产快繁，由于其技术和设备条件均要求很高，脱毒试管苗的切段快繁技术的好坏，直接关系到马铃薯种苗脱毒的成功与否，所以把握好每一个环节的技术要点非常关键。 一、洗瓶 扩繁的苗瓶可用三角瓶或小灌头瓶，按需要量准备充足。用清洁热水加入适量的洗衣粉，用试管刷涮洗苗瓶，达到瓶壁水珠分布非常均匀，透明感强，然后倒置在网架上凉干水珠待用。 二、配制培养基 1.称药品 根据培养基配方的用量，用托盘天平称琼脂（按每升蒸馏水加7g琼脂）、蔗糖（按每升蒸馏水加20-30g蔗糖）；用电光分析天平按下列配方（MS配方）称出药品，并编号。 2.配母液 将称量的药品分类按排号溶在器皿的蒸馏水中，蒸馏水能充分溶解药品为宜，药品加入的顺序为：大量元素以先单价后双价加入，最后加入钙盐，即配成母液。 3.制作培养基 （1）首先用量筒量出所需的蒸馏水，用大铝锅盛装，将称得的琼脂侵在大铝锅的蒸馏水中，然后将大铝锅边加热边搅动使琼脂充分溶解后再加入蔗糖使其溶解。 （2）在充分溶解的琼脂和蔗糖溶液中分别加入母液1、母液2、母液3、母液4，母液5用小火继续加热使其充分溶解，再用沸蒸馏水定容。 （3）调节配养基pH值。用pH试纸检验，显酸性时，用滴管滴加NaOH；或KOH显碱性时滴加磷酸或盐酸溶液，直至pH试纸测得pH值为5.7为宜，即培养基已配制完备。 三、装瓶 将配制好的培养基分别装在洗净的苗瓶中，每瓶定容15-20mL，然后用封口膜封口，将其送到消毒室待消毒。 四、高压消毒 用高压灭菌锅进行灭菌消毒。在120-124℃下，消毒25min，即消毒结束，停止加热后约过20-30min取出苗瓶。 五、无菌操作室内消毒灭菌 1.熏蒸 无菌室刚开始工作或间隔2-3个月未进行消毒时，先熏蒸消毒。熏蒸按每立方米空间计算，即1m3空间按10：7的高锰酸钾溶液放盆中，马上关闭门窗，间隔1-2d后即可在室内工作。 2.紫外线消毒 将工作服、口罩、拖鞋、盛装75%的酒精瓶、剪刀、镊子、酒精灯、苗源瓶、扩繁瓶、封口膜、线绳或皮筋、干净纱布等无菌室所需物品放在无菌室固定位置，启动超净工作台，通风杀菌，室内紫外灯打开消毒，工作人员快速离开无菌室，灭菌25-30min即可。 六、试管苗切段扩繁 工作人员按无菌操作程序进入无菌室，穿戴好消毒服装，用75%的酒精将双手消毒，再用酒精侵湿干净的纱布擦拭超净工作台面、苗源瓶、扩繁瓶、将剪刀、镊子插入酒精瓶，就可进行切断接苗。方法是：关闭超净工作台杀菌开关，点亮酒精灯，取掉扩繁瓶的封口膜，瓶口稍斜，离酒精灯芯0.5cm用手轻轻转动，直至瓶底以上部全部消毒一遍，然后放在超净工作台的右边，再取掉苗源瓶的封口膜用同样的方法在酒精灯上消毒一遍，防止小苗被烧伤，然后放在超净工作台左边；最后把剪刀和镊子从盛75%的酒精瓶内取出，放在酒精灯离灯芯0.5cm处上下转动消毒一遍，稍凉片刻，用镊子将苗源瓶中的小苗夹出瓶口，只留根部在瓶内，用剪刀剪掉根部，然后再用镊子夹小苗离扩繁瓶口1-2cm处（注意不要让小苗挨上扩繁瓶口，以防感染），剪带一片小叶的茎段放在扩繁瓶中，一般扩繁瓶可接15-20个茎段。封口膜在酒精灯上稍消毒后封口，然后在瓶外壁注明接苗品种、年月日、切苗人员姓名。 七、培养 把切断接好苗的扩繁瓶送到培养室进行培养，培养室温度控制在25℃，光照2000—3000勒克斯，如用日光灯为光源，每天光照16h为宜；相对湿度保持在75-80%之间，切段扩繁后3-4d如果发现有污染瓶，须马上将污染瓶移离培养室。健康苗50-60d就可以再扩繁或作扦插的基础苗。 1