来氟米特对胶原诱导性关节炎大鼠部分机理探究.doc

来氟米特对胶原诱导性关节炎大鼠部分机理探究[摘要]目的探讨来氟米特对胶原诱导性关节炎大鼠部分机理。方法建立大鼠 (CIA)模型，评检测血清抗Ⅱ型胶原抗体IgG和IgM水平、关节组织匀浆上清和血清中促炎细胞因子IL-1、TNF 以及血清炎症介质PGE2的含量变化。结果与模型组比较来氟米特明显的抑制了血清IgG、IgM水平增高，降低了关节组织和血清中IL-1、TNF 和IL-6以及血清PGE2的含量。来氟米特对于RA作用机制可能与抑制促炎细胞因子和炎症介质的产生有关。 [关键词]来氟米特； 胶原诱导性关节炎； 作用机制 [中图分类号] R965.1 [文献标识码]A [文章编号] 1005-0515（2010）-12-173-01 来氟米特属于异凹唑类药物，是一种新的免疫抑制剂。临床研究发现，其对于类风湿关节炎的治疗是安全有效的，对于改善RA的临床症状与甲氨喋呤、硫氮磺胺吡啶作用相似，减轻软骨侵蚀和骨质破坏，有效的改善症状，阻止病情的发展，不良反应减少[1]。本文对来氟米特治疗胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）大鼠进行了研究，并对部分作用机制进行了探讨。 1 材料 1.1动物健康雄性Wistar大鼠，清洁级，体重170±10g。 1.2药品及试剂来氟米特（福建汇天生物药业有限公司）。牛Ⅱ型胶原(CII)购于chondrex；完全弗氏佐剂（CFA）购于Difco公司；IL-1、TNFα和PGE2放射免疫分析法（RIA）测定试剂盒，PGE2酶联免疫吸附法检测试剂盒；Rabbit Anti-RatIgM (bsb-0346R)、Rabbit Anti-RatIgG (bsb-0293R)、strep tavidin/HRP(bsb-0437R)，北京博奥森生物技术有限公司产品。 1.3 仪器GC911放射免疫γ计数器；Multiskan Ascent酶标仪(芬兰Labsystems公司)。 2 方法 2.1 造模及给药将大鼠随机分为3组，正常组、模型组、治疗组，每组12只。除正常组外，其余2组按文献方法[2]制备CIA模型，具体方法为：取适量牛Ⅱ型胶原乳化剂，溶于0.1 mol?L-1醋酸（4℃过夜），加入完全弗氏佐剂（CFA），混悬乳剂充分乳化，以滴入水中呈珠状为度，取适量配好的乳剂，每只大鼠以0.1ml（含100μgCⅡ）于尾根部皮下散点注射。第7天等量乳化剂激发免疫。于第二次免疫后开始灌胃给药，25 mgkg-1，连续4w。同时，正常组和模型组灌服等容积蒸馏水。 2.2 取材及组织处理免疫后第35天大鼠眼球后静脉丛取血，4℃离心，取血清-20℃保存待用；取左后踝关节去皮、液氮冷冻后进行组织匀浆，取上清-20℃保存待用。 2.3 血清抗CII抗体IgG、IgM含量参考文献[2]采用酶联免疫吸附法检测；促炎细胞因子和炎症介质含量，放射免疫分析法检测血清和关节组织匀浆上清中促炎细胞因子IL-1、TNFα的含量，酶联免疫吸附技术检测血清PGE2的含量，具体操作按试剂盒的说明书进行。 2.4 统计方法软件用SPSS13.0，采用多因素方差分析。实验结果以（x±s）表示。 3 结果 3.1 来氟米特对CIA大鼠抗CII抗体含量的影响。见表1 表1来氟米特对CIA大鼠血清抗CII抗体 IgG、IgM含量的影响（x±s，n=12） 注：模型与正常组比较:# P 1