塞来昔布对糖尿病大鼠视网膜凋亡抑制蛋白Bcl2表达的影响.docVIP

　　塞来昔布对糖尿病大鼠视网膜凋亡抑制蛋白Bcl2表达的影响 【摘要】 目的：探讨塞来昔布对糖尿病(diabetes mellitus，DM)大鼠凋亡抑制蛋白Bcl2表达的影响。方法：将40只大鼠模型,随机分成DM 组(n=20)和塞来昔布灌胃(celecoxib group，Cel)组(n=20)。另10只正常大鼠为正常对照组(contrast group, Con)。3mo后处死全部大鼠,制备大鼠视网膜石蜡切片,应用免疫组化法及HP IAS1000型高清晰度彩色病理图文分析系统观测大鼠视网膜Bcl2的表达。结果：Con组Bcl2反应阳性弱,表达量低; DM组Bcl2反应呈强阳性,表达增高(Plt;0.01) ;Cel组Bcl2反应阳性减弱,表达降低 (Plt;0.01)。结论：Cel能够减少STZ诱导的DM大鼠视网膜凋亡抑制Bcl2蛋白表达。 【关键词】 糖尿病视网膜病变;凋亡抑制蛋白Bcl2;塞来昔布 　　Correspondence to:ZhanYu Zhou.Department of Ophthalmology, Affiliated Hospital of Medical College, Qingdao University, Qingdao 266000, Shandong Province,China.zhouzhanyu1125163. 　　Abstract 　　METHODS: Forty )最常见和严重的眼部并发症,已成为目前世界上主要的致盲眼病之一,早期预防和 治疗 DR是当前眼科领域攻关的重要课题。视网膜新生血管的出现是DR最早出现的特异性改变，视网膜新生血管通常由视网膜毛细血管周细胞凋亡抑制所致。已有充分研究表明，在DM 大鼠视网膜中COX2表达含量常显著增高[1]。实验证明，塞来昔布(celecoxib，Cel)作为新型的特异性 COX2抑制剂,通过抑制 COX2的活性抑制视网膜 VEGFmRNA的表达,引起视网膜细胞合成 VEGF蛋白减少[2]。血管内皮生长因子(VEGF) 是内皮细胞(endothelial cell, EC)的存活因子,它阻止了缺血诱导的细胞凋亡并且能诱导 EC表达凋亡抑制蛋白Bcl2，从而参与毛细血管的凋亡过程DR病理变化,并在视网膜新生血管的发生 发展 过程中起着重要作用。利用选择性的 COX2抑制剂可使 VEGF和bFGF等多种促血管生成因子的表达降低，下调凋亡抑制蛋白Bcl2表达从而阻断这些模型中的新生血管生成。我们探讨选择性COX2抑制剂Cel对链脲佐菌素(STZ)诱导的早期DM大鼠视网膜中Bcl2表达情况。应用免疫组化法及彩色病理图文分析系统观测在不同处理因素下DM大鼠视网膜Bcl2的表达 ,以探讨Cel对DM大鼠视网膜凋亡蛋白Bcl2表达的影响。 　 　1材料和方法 　　1.1材料 　　健康成年无眼疾的annheim公司) 55mg/kg。另10只大鼠分为正常对照组(contrast group, Con),每只ip等体积枸橼酸盐溶液。注射STZ 24～48h检测尿糖 (+++)以上、72h后取尾血测血糖≥16.7mmol/L者确定为DM大鼠。模型建立后每周监测1次定性尿糖、体质量、24h尿量和饮水量,每月检测1次血糖。DM大鼠随机分为DM组和Cel灌胃组，每组20只。DM模型建立2d后,Cel灌胃组大鼠经口灌胃Cel 50mg/kg, 2次/d,DM组灌胃等体积生理盐水。各组大鼠单笼喂养,自由进食、饮水。饲养3mo。除去死亡及血糖恢复正常大鼠,最终每组15只入组。图1Bcl2凋亡抑制蛋白的表达 A：Con组;B：DM组;C：Cel组。 　　1.2方法 　　喂养3mo末,以过量戊巴比妥钠麻醉处死大鼠,轻摘左眼球,放入预先配置的40g/L中性甲醛溶液中。将各组大鼠的右侧眼球,也固定于40g/L多聚甲醛液中(4℃,12h)。于锯齿缘后0.15mm处剪开眼球壁,去除眼前节和玻璃体,余下的眼杯进行全层石蜡包埋,制作5～7μm切片。以微波处理10min (95℃);30mL/L H2O2700mL/L甲醇室温处理30min;30mL/L正常小牛血清室温孵育30min;抗Bcl2抗体即一抗(Santa Cruz,USA,为多克隆抗体,浓度各为1∶150),湿盒内4℃孵育20h;生物素标记的羊抗兔血清即二抗(Vector Laboratory,USA) 1∶200,湿盒内37℃孵育1h;卵白素2生物素即ABC复合物(Vector Laboratory,USA)湿盒内于37℃孵育1h; DAB呈色,显微镜下监视反应,约10min,以蒸馏水停止反应。苏木素复染梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。阴性对照:以正