脑缺血再灌注后大鼠IGF1及其受体表达对其神经行为的影响.docVIP

　　脑缺血再灌注后大鼠IGF1及其受体表达对其神经行为的影响 ：孙锋 刘蔚 丁晓洁 王超 郭云良 【摘要】 　　目的 观察脑缺血再灌注后大鼠胰岛素生长因子1(IGF1)及其受体（IGF1R）表达对其神经行为的影响。方法 成年健康雄性CAO/R）模型。应用BEDERSON评分法评价脑缺血再灌注后神经行为功能，免疫组织化学技术检测IGF1和IGF1R表达。结果 脑缺血再灌注后各组动物均出现不同程度的神经功能受损，从再灌注3 d开始神经功能逐渐恢复，但至再灌注7 d才有显著性差异。免疫组化检测显示，脑缺血再灌注后脑组织IGF1和IGF1R表达区域和时相变化规律基本一致，再灌注12 h～7 d持续高表达，1～3 d达高峰。结论 脑缺血再灌注后IGF1和IGF1R的早期表达可能对神经功能恢复有一定的促进作用。 【关键词】 脑缺血 神经行为功能 胰岛素生长因子 1 胰岛素生长因子 1受体 　　［ABSTRACT］ Objective To investigate the effects of insulinlike groic reperfusion in rats. Methods A middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model ade in 28 healthy male adult CAO/R animals appearred different extent of neurofunctional impairment. Recovery started from the 3rd day after reperfusion, its significant improvement on 7th day. The expressions of IGF1 and IGF1R lasted for 12 h-7 days after reperfusion, reached its peak for 1-3 days, ephase. Conclusion The early expressions of IGF1 and IGF1R might enhance the neurofunctional recovery after cerebral ischemic reperfusion. 　　［KEY CAO/R）模型。模型成功的标志：动物苏醒后出现左侧Horner征、右侧以前肢为重的偏瘫，爬行时向右侧划圈。假手术组除不插线外，其余步骤同实验组。实验中出现呼吸困难、出血过多、死亡以及术后2 h仍不能苏醒的动物弃去不用，并另选动物补足4只。 　　1.2 神经行为功能测试 　　各组动物分别于脑缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d按BEDERSON评分法评分[3]。 　　1.3 标本的采集和处理 　　各组大鼠按规定的再灌注时间点取材，假手术组于术后24 h取材。以100 g/L水合氯醛（300 mg/kg）腹腔注射麻醉动物，用40 g/L甲醛溶液经心脏灌注固定，断头完整取脑，置于40 g/L甲醛溶液后固定2 h，蒸馏水浸泡4 h。切取视交叉后方约5 mm的脑组织，常规脱水、透明、石蜡包埋。自视交叉后缘开始连续冠状切片（厚度5 μm），每隔10张抽取1张，贴于多聚赖氨酸处理的玻片上，晾干备用。甲苯胺蓝染色尼氏体呈深蓝色，核染色呈淡蓝色，背景浅淡。 　　1.4 免疫组化染色 　　兔抗大鼠IGF1和IGF1R单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供，链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶连接法（SP）免疫组化试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供。标本切片常规脱蜡、水化，按试剂盒提供的实验步骤操作，DAB显色，光镜下观察，胞浆出现棕色颗粒为阳性着色。高倍镜下（400倍）在皮质区和纹状体区随机各取4个视野计数阳性细胞，结果以±s表示。 　　1.5 统计学分析 　　采用SPSS 11.0软件进行统计学分析，组间比较采用t检验。 　　2 结果 　　2.1 神经行为功能评分 　　假手术组动物神经功能评分均为0分（无神经损伤症状），脑缺血再灌注后各组动物均出现不同程度的神经功能缺损，评分为1～3分。从时间上来看，再灌注6 h～1 d神经功能缺损明显，从再灌注3 d开始，各组动物神经功能逐渐恢复，评分逐渐减少，脑缺血再灌注后7、14 d神经功能评分与再灌注6 h相比较，差异有显著意义（t=5.172、3.846,Plt;0.05）。见表1。 　　2.2 甲苯胺蓝染色检查 　　假手术组脑组织神经细胞形态结构正常、排列均匀，呈卵圆形或多边形，细胞浆尼氏体呈深蓝色，细胞核呈均