Thermomonospora curvata淀粉分支酶的过量表达及其催化反应机理研究.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.6 Thermomonospora curvata 淀粉分支酶的过量表达 及其催化反应机理研究 1,2 2 1,2 1 范琴 ，谢正军 ，金征宇 ，田耀旗 （1.江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡 214122 ）（2.江南大学食品学院，江苏无锡 214122 ） 摘要：本文以质粒 pET-22b(+)为载体，Thermomonospora curvata 淀粉分支酶基因(TcSBE)为客体，采用构建重组大肠杆菌 BL21(pET-22b(+)-TcSBE)的方法,实现TcSBE 过量表达。目标分支酶经分离纯化，酶活达90.28 U/mg，并分别以长直链淀粉和短直链 糊精为底物，研究了TcSBE 作用淀粉机理。结果表明：TcSBE 以链间反应模式催化长直链淀粉生成大分子的支链淀粉和小分子的低 聚糖；以短直链糊精为底物时，TcSBE 通过水解作用和转糖基作用同时作用于底物，反应初期，水解作用较强，将底物随机水解成 聚合度不等的小分子直链糊精，所需供体链的最低聚合度（DP ）为12，随着反应的进行，水解作用不断减弱，转糖基作用增强，将 DP 3~8 的短链糊精通过α-1,6 糖苷键与产物相连接，使产物中分支侧链含量增加，反应12 h 后，TcSBE 作用产物的α-1,6 糖苷键含量 达到0.9 mM。 关键词：淀粉分支酶；过量表达；作用机理；转糖基反应 文章篇号：1673-9078(2016)6-70-76 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.6.012 Overexpression of Starch Branching Enzyme from Thermomonospora curvata and Its Catalytic Mechanism Research 1,2 2 1,2 1 FAN Qin , XIE Zheng-jun , JIN Zheng-yu , TIAN Yao-qi (1.State Key Laboratory of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China) (2.School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China) Abstract: A gene (TcSBE) encoding starch branching enzyme from Thermomonospora curvata was cloned into the plasmid of pET-22b(+) and overexpressed in Escherichia coli BL21. The recombinant enzyme was purified and showed a high specific activity to amylose with 90.28 U/mg. The reaction mechanism of TcSBE was examined relative to its reaction model and transglycosylation for amylose and linear dextrin. The results indicated that Tc