PabPurSulfoLinkBeads抗体偶联1208-常州天地人和生物科技有限.PDF

PabPur SulfoLink Beads 目录 1. 产品介绍………………………………………………………………….……..1 2. 纯化流程………………………………………………………………………...1 3. 问题及解决方案…….………………………………………………………...4 4. 订购信息及相关产品…………………………………………………………4 1.产品介绍 PabPur SulfoLink Beads 是一类预活化树脂 ，可以通过与巯基或者氨基的反应实现抗原 的固定化 ，进而对免疫血清中的抗体进行纯化。PabPur SulfoLink Beads 可以得到高效 价的目标抗体 ，是多克隆抗体生 中不可缺少的纯化介质。具体性能见表1。 表1. PabPur SulfoLink Beads 品性能 性能 指标 基质 4%琼脂糖微球 配体 碘乙酸 载量 ＞3mg lgG/ml 介质 粒径 (μm) 45-165 最 流速 0.1MPa, 1 bar pH 稳定范围 5-10 储存缓冲液 1M NaCl 储存温度 2℃-8℃ 2.纯化流程 PabPur SulfoLink Beads 针对巯基和氨基的偶联条件有所差异 ，对于含有巯基抗原偶联 请参考2.1 流程 ，对于含有氨基抗原偶联请参考2.2 流程， 2.1 含巯基抗原的偶联流程 2.1.1 缓冲液准备 所用水和 Buffer 在使用之前建议用0.22 μm 或0.45 μm 滤膜过滤。 偶联液：50 mM Tris, 5 mM EDTA-Na, pH 8.5 封闭液：50 mM Tris, 5 mM EDTA-Na, 50 mM L-半胱氨酸，pH 8.5 保护液：20 mM 磷酸盐缓冲液 ，20% 乙醇 ，pH 8.0 结合/洗杂液: 20 mM 磷酸盐缓冲液 ，pH 8.0 洗脱液: 100 mM 甘氨酸，pH 2.5-3.0 中和液：1 M Tris-HCl, pH 8.5 2.1.2 抗原准备 1 / 4 州天地人和生物科技有限公 司 抗原样品使用前务必确保其巯基处于还原状态（可以使用Ellman’s Reagent 检测自由巯 基的含量 ）。如果巯基已经氧化，必须对抗原进行还原 ，一般推荐使用还原剂TCEP （Tris(2-carboxyethyl)phosphine ），TCEP 溶液很稳定 ，可以选择性的、高效的打开抗原 中的二硫键 ，并且不影响抗原与树脂的偶联反应，每 克抗原中TCEP 的添加量不超过 12mg ，需要自己进行优化。如果使用 DTT 等含有巯基的还原剂 ，处理完样品必须要将还 原剂去除 ，否则会影响抗原与树脂的偶联效率。 使用偶联液溶解抗原，制备成终浓度为1-3 mg/ml 的抗原溶液。建议该溶液现用现配，储 存时间过长会影响偶联效果。 2.1.3 抗原偶联 1) 取适量的PabPur SulfoLink Beads ，加入合适的重力柱中，靠重力流干保护液 ，用3 倍柱体积的偶联液平衡树脂，待偶联液流干 ，再加入3 倍柱体积的偶联液 ，重复操作2 遍。共使用9 倍柱体积的偶联液。 2) 关闭柱子的下端出口，加入等体积的含巯基的抗原，混匀 ，取出至于合适的离心管中， 置于28℃震荡孵育30min。 注 ：确保树脂充分悬浮起来 ，否则将 影响偶联效率。 3) 将上述反应体系取出 ，转移至重力柱中，流干其中溶液 ，并收集流出，再用3 倍柱体 积的偶联液清洗树脂，合并两次流出。 注 ：如有需要 ，可以使用Ellman’s Reagent 检测其中巯基含量 ，得出抗原残留量，从而 计算偶联效率。 4) 关闭柱子的下端出口，加入等体积的封闭液 ，混匀 ，转移至合适的离心管中，置于28℃ 震荡孵育30min。 5) 将上述反应体系取出 ，转移至重力柱中，流干其中的封闭液