里氏木霉木聚糖酶基因XYN2的克隆与表达.pdfVIP

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里氏木霉木聚糖酶基因XYN2的克隆与表达

第 29卷第 5期 南  京  工  业  大  学  学  报 Vo l. 29 No. 5 2007年 9 月 JOURNAL OF NANJ IN G UN IV ER SITY OF TECHNOLO GY Sep. 2007 里氏木霉木聚糖酶基因 X YN 2 的克隆与表达 1 2 1 1 王向明 ,欧阳嘉 ,严  明 ,许  琳 ( 1. 南京工业大学 制药与生命科学学院 , 江苏 南京 2 10009; 2. 南京林业大学 化学工程学院 , 江苏 南京 2 10037) ( ) 摘  要 : 采用 R TPCR reversetran scrip tion PCR a ssay 技术 ,从里氏木霉 QM 94 14 mRNA 中扩增出木聚糖酶基因 X YN 2 ,并与质粒 pYX2 12相连 ,构建了组成型表达载体 pYX2 12 /X YN 2. 将此重组质粒转化入酿酒酵母菌株 YPH499 进行表达. 分析了不同碳源 、温度 、摇瓶转速 、初始 pH 对其产酶的影响. 实验结果表明 ,最佳碳源是葡萄糖 ,最佳转 速是 260 r/m in,最佳初始 pH 是 60. 优化重组菌的发酵条件后得到的最大酶活为 055 IU /mL. 关键词 : R TPCR; Trichoderm a reesei X YN 2基因;酿酒酵母 ;克隆;表达 中图分类号 : Q786   文献标识码 : A    文章编号 : 1671 - 7627 (2007) 05 - 0082 - 06 C lon ing and expression of the T. reese i xy lana se gene XYN 2 1 2 1 1 WAN G X iangm ing , OU YAN G J ia , YAN M ing , XU L in ( 1. College of L ife Science and Pharm aceu tical Engineering, N anj ing U n iversity of Technology, N anj ing 2 10009 , Ch ina; 2. College of Chem ical Engineering, N anj ing Fore stry U n iversity, N anj ing 2 10037, Ch ina) A b stract:X YN 2 gene fragm en ts were succe ssfu lly amp lified from Trichoderm a reesei strain QM 94 14 mRNA by R T PCR ( reversetran scrip tion PCR a ssay) techno logy and were ligated to p YX2 12 vector a s the exp re ssion vector p YX2 12 /X YN 2. S accha

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