α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞作用的的分析研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 目的 通过观察植物雌激素 α 玉米赤霉醇 （α-ZAL）对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的 作用，研究植物雌激素 α-玉米赤霉醇对大鼠成骨细胞增殖、分化及蛋白表达的影响，探 讨植物雌激素 α-玉米赤霉醇在骨代谢中的作用机理，以期为骨质疏松防治药物的研究开 阔思路。 方法 1.采用二次酶消化法分离培养新生 （24h）SD 乳鼠颅盖骨成骨细胞。 2.应用钙钴法碱性磷酸酶 (ALP)染色和茜素红矿化结节染色来鉴定成骨细胞。 3.应用噻唑兰 (MTT)法测定植物雌激素 α-玉米赤霉醇对成骨细胞增殖的影响。 4.采用对硝基苯二钠基质动力学法检测了 24 h 和 48h 成骨细胞碱性磷酸酶活性的 改变。 5.采用免疫组化法观察 α玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞的 Bax、Bcl-2 表达的影 响。 结果 1.细胞形态学观察：刚接种的原代成骨细胞呈球形，24h 内存活细胞已沉降贴壁， 培养第 2 天能够完全展开，呈三角形、梭形，核明显增大；传代培养 5 天，细胞形态可 见多样化，胞浆丰富，向外伸展，伸出多个伪足，与周围细胞的伪足相互连结，细胞半 融合；培养一周左右，可见长索形、多角形、条索形，汇合时细胞呈铺路石状，可重叠 生长。 2.成骨细胞的鉴定：ALP 染色可见 90%细胞染色阳性,胞质中出现灰黑色颗粒或块状 沉积，矿化结节呈橘红色结节、边界清晰，可证明为成骨细胞。 -5 -10 3.对大鼠成骨细胞增殖的影响：大鼠成骨细胞在含有不同浓度 （10 mol/L~10 -10 mol/L）α 玉米赤霉醇以及含有 10 mol/L 的雌二醇和无药物的培养基中培养 24h 后， -7 -10 与 E2 组比较，α-ZAL 10 mol/L、α-ZAL 10 mol/L 这两种浓度差异无显著性 （P 0.05）， 说明这两种浓度有促进成骨细胞增殖的作用 4.对大鼠成骨细胞外碱性磷酸酶活性的影响：与正常组比较，三组均有显著性差异， Ⅰ 摘 要 -7 -10 与 E 组比较，α-ZAL 10 mol/L、α-ZAL 10 mol/L 这两种浓度差异无显著性 （P 0.05）， 2 说明这两种浓度均可以促进成骨细胞分泌 ALP。在促进成骨细胞分泌 ALP 的过程中，随 着用药天数的增加，ALP 含量也增加。 -7 5. α-ZAL 对 Bcl-2，Bax 蛋白表达分析的影响：α-ZAL （10 mol/L ）组、α-ZAL -10 （10 mol/L）组抑制成骨细胞凋亡的作用。 结论 1.一定浓度的 α-玉米赤霉醇可以促进成骨细胞的增殖分化，说明它们对骨都具有雌 激素样活性。 2.Bax/Bcl-2 参与成骨细胞的凋亡过程,一定浓度的 α-玉米赤霉醇可以通过调节 Bax/Bcl-2 起到关键调控作用。 关键词 绝经后骨质疏松症 α-玉米赤霉醇 Bax/Bcl-2 细胞培养 Ⅱ Abstract Abstract Objects ： To investigate the effect of Effect of α-ZAL on osteoblasts cultured in vitro. It stud