清开灵注射液细菌内毒素检查探究.doc

清开灵注射液细菌内毒素检查探究摘要：目的：建立清开灵注射液细菌内毒素检查法。方法：采用《中国药典》2005年版附录细菌内毒素检查法。结果：清开灵注射液经30倍稀释后，用灵敏度为0.25EU/mL的鲎试剂检查细菌内毒素无干扰因素的影响。结论：清开灵注射液可应用鲎试剂进行细菌内毒素检查。? 关键词：清开灵注射液；细菌内毒素；干扰试验? 中图分类号：R285.1文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)04-0671-03 清开灵注射液为临床常用中药注射剂，是中国药典2005年版所收载的品种。其功效为清热解毒、化痰通络、醒神开窍；可用于热病神昏，中风偏瘫，神志不清；也可用于治疗急慢性肝炎、乙型肝炎、上呼吸道感染、肺炎、高烧等。其质量标准中规定以家兔法检查热原［1］。已有清开灵注射液细菌内毒素检查法的相关报道，但有的研究仅选择一或二个厂家生产的清开灵注射液［1-4］，有的研究仅选择一个厂家生产的鲎试剂［2，4］。此外，随着中药现代化进程的加快，有的生产厂家已采用了新的清开灵注射液生产工艺［5］。笔者认为，应参照《中国药典》2005年版“细菌内毒素检查法”、“细菌内毒素检查法应用指导原则”，对清开灵注射液应用鲎试剂进行细菌内毒素检查的可行性进行研究。现报道如下。? 1材料与试剂? 1.1清开灵注射液①广州白云山明兴制药有限公司，规格：10mL，批号：050805；050815；050926。②河北神威药业有限公司，规格：10mL，批号0509120111③北京中医药大学药厂，规格：10mL，批号：512411A；512201A。④吉林省集安益盛药业股份有限公司；规格：10mL，批号：050917 4；060103 7。? 1.2鲎试剂（TAL）①湛江安度斯生物有限公司；规格：0.1mL，批号：0412010，灵敏度：0.25EU/mL；规格：0.1mL，批号：0509160，灵敏度：0.125EU/mL；规格：0.1mL，批号：0410270，灵敏度：0.125EU/mL。②厦门鲎试剂厂，规格：0.1mL，批号：051033，灵敏度：0.25EU/mL。③湛江博康海洋生物有限公司，规格：0.1mL，批号：0603150，灵敏度：0.25EU/mL。? 1.3细菌内毒素工作标准品（CSE）批号：2003-3 （150EU/Amp），中国药品生物制品检定所生产。? 1.4细菌内毒素检查用水（WBET）批号：2005-120，中国药品生物制品检定所生产。? 2限值的确定? 公式：L＝K/M。K为5EU/（kg#8226;h）M为40mL/（60kg#8226;h）(清开灵注射液说明书：重症感染者静脉滴注1日20～40mL，以10％葡萄糖注射液200mL或氯化钠注射液100mL稀释后使用)，L＝7.5EU/mL。? 3实验? 3.1鲎试剂灵敏度复核实验 按照中国药典2005年版二部附录细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核，结果见表1所示。? 5批鲎试剂经用细菌内毒素工作标准品检查λc与λ一致，结果均符合规定。? 3.2干扰实验预实验①丹参有效稀释倍数（MVD）的计算：公式MVD＝L/λ。其中L为清开灵的细菌内毒素限值7.5EU/mL，λ为鲎试剂标示灵敏度，目前市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.5～0.03EU/mL则清开灵的对应有效稀释倍数为：②实验操作：将清开灵注射液用细菌内毒素检查用水分别5、7.5、10、15、20、30、40、80倍稀释，将此系列浓度溶液记为NPC。? 同时在上述清开灵注射液5、7.5、10、15、20、30、40倍稀释液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的试验液中均含有2λ浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。? 取灵敏度为0.25EU/mL和0.125EU/mL的两个不同厂家的鲎试剂，分别与上述PPC和NPC进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性和阴性对照。? 由以上预干扰实验结果可以初步了解：两个厂家鲎试剂对清开灵的细菌内毒素的试验结果均在15倍以下稀释时无抑制干扰。? 3.3正式干扰实验 为了最终确认是否存在抑制因素的影响，进行以下正式干扰试验。? 取清开灵注射液用细菌内毒素检查水分别进行稀释，使其最终干扰试验为30倍稀释液，按中国药典2005年版二部附录中的细菌内毒素检查供试品干扰实验项进行实验，结果见表3-1、3-2、3-3。? 表3-1样品溶液（30倍稀释）的干扰实验（厦门鲎试剂厂 lot No.051033,λ=0.25Eu/mL）样品内毒素浓度EU/mL） ? 4样品细菌内毒素检查? 按中