温郁金对饮用MNNG大鼠胃黏膜增殖影响.doc

温郁金对饮用MNNG大鼠胃黏膜增殖影响摘要：目的：探讨姜科姜黄属植物温郁金水蒸气蒸馏提取液对饮用化学致癌剂(N－甲基－N－硝基－亚硝基胍，MNNG)的wistar大鼠胃黏膜PcNA表达的影响。方法：80只wistar雄性大鼠随机分为A、B、C、D、E 5组，每组16只，A组为空白组，饮用纯净水，生理盐水5mL灌胃1次/天；B组为造模组，自由饮用100g/mL的MNNc溶液，生理盐水5mL灌胃1次/天；C组：MNNG饮用量同B组，塞来昔布10mg/kg剂量5mL灌胃1次/天；D、E组MNNc饮用量同B组，1g/mL和2g/mL的温郁金水蒸气蒸馏提取波5mL灌胃1次/天。B－E组实验初6周予10％NacI溶液1mL每周灌胃1次。实验时间40周，实验期间死亡、经病理证实有或无胃肿瘤的动物均为有效动物，计入诱癌情况统计。完成实验之动物于第41周处死，取胃黏膜(已致瘤者选取致瘤部位)免疫组化检测PCNA表达，Leica图像分析系统分析结果。结果：PCNA阳性表达主要见于细胞核内，C、D、E组大鼠PCNA积分光密度均低于B组，差异有统计学意义(P＜0.05)，D组与C组比较PCNA积分光密度差异无统计学意义(P＞0.05)，E组PCNA积分光密度高于D组和E组，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：温郁金水蒸气蒸馏提取液可抑制饮用MNNG大鼠胃黏膜PCNA的表迭，这可能是其降低胃癌发生率，显示较好胃癌化学预防能力的机制之一。 关键词：温郁金；PCNA；胃癌；MNNG 中图分类号：R－33　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1868－03 温郁金是姜科姜黄属植物的一种，作为传统中药应用广泛。关于郁金的许多现代研究表明郁金提取物对体内外肿瘤细胞的增殖均有抑制作用，有一定的预防肿瘤能力。PCNA是真核细胞DNA合成所必须的一个酸性蛋白，其表达水平反应细胞增殖状态，可以作为组织恶性化转变过程及程度的一个重要指标，与胃癌的发生，发展，转移有着密切的关系，两者具有较好的相关性。为了进一步明确温郁金对肿瘤的作用，笔者研究了温郁金对饮用MNNG大鼠胃黏膜PCNA表达的影响，以期探讨其预防肿瘤作用机制。 1　材料与方法 1．1 材料 温郁金产自浙江温州，水蒸气蒸馏提取液由本院制剂中心制备。6周龄雄性Wistar大鼠80只，平均体重180－200g，购自中科院上海动物研究所，饲养于浙江中医药大学实验动物中心，专人管理。MNNG购自Adfich公司，塞来昔布购自SEARLE公司，NaC1购自华东医药公司。PCNA小鼠抗大鼠单克隆抗体购自LAB VISION公司PV－6001(PowerVisionTM－Tow－Step)免疫组化检测试剂盒购自北京中山金桥生物技术有限公司。 1．2　动物分组及处理　80只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D、E 5组，每组16只。A组为空白组，仅给予纯净水饲养同时予生理盐水5mL灌胃1次/天；B组为造模组，自由饮用浓度为100μg/mL的MNNG液同时予生理盐水5mL灌胃1次/天；C组(塞来昔布组)：MNNG饮用量同B组，同时予塞来昔布10mg/kg剂量5mL灌胃1次/天；D(一倍郁金组)、E(两倍郁金组)MNNG饮用量同B组，同时分别予1g/mL和2g/mL浓度的温郁金水蒸气蒸馏提取液5mL灌胃1次/天。B－E组实验初6周予10％NaCI溶液1mL灌胃1次/周。实验时间40周，第41周处死动物，留取标本。 1．3　标本处理　实验期间死亡动物留取胃黏膜标本，计入诱癌率统计。第41周处死动物，解剖，取出胃，沿大弯切开，将腺胃沿纵轴5等分迅速放入10％中性福尔马林溶液中固定(已致瘤者取成瘤部位)，石蜡包埋，病理连续切片为3μm厚，留取1张行常规HE染色，1张按相关试剂盒说明(PowerVisionTM－Tow－Step)检测组织PCNA的表达。 1．4　PCNA表达结果分析　用显微镜先在100倍视野下确定5个染色明显区域，再在400倍视野下记录每个区域一个视野内的阳性细胞数及细胞总数，取其平均值，以阳性细胞数/细胞总数≥1％为PCNA表达阳性，计算每组阳性表达率。 采用德国Leica standard Version 2.8多媒体彩色病理图像分析系统对细胞核内表达的PCNA进行定量分析。 在光学显微镜×40倍视野下选定所要进行测定的病变组织，冻结图象，将光镜下的组织图象经显微摄象系统输入计算机，然后启用自动图象分析系统，首先对所选定视野组织细胞PCNA行光密度测定，继而用光标笔采集勾画出拟行测定的细胞核轮廓，进行选择性修饰后，通过计算机自动数据采集系统计算出所测视野阳性细胞核面积，并计算积分光密度。每个标本均按上述标准选取5个视野