痰液直接涂片法及沉淀法找结核分枝杆菌比较探究.doc

痰液直接涂片法及沉淀法找结核分枝杆菌比较探究[关键词] 痰液直接涂片法;沉淀法;结核分枝杆菌 [中图分类号] R446.5 [文章标识码]A[文章编号] 痰液涂片法找结核杆菌,至今仍是发现肺结核的主要手段。但直接涂片时,由于痰液的粘稠,结核分枝杆菌分布不均匀,也不能制片太厚,结核分枝杆菌被涂到玻片上的机率和数量有限,而且往往与杂菌细胞共存,背景杂乱,互相遮掩,因而较易漏检,检出率低。我们通过离心沉淀,将整个标本的抗酸杆菌全部浓缩在一张玻片上,从而提高了标本的阳性率。 1 材料与方法 1.1 标本来源 本院256 例临床疑似的肺结核病人,其中男144例,女112例,年龄6-85岁。以隔夜痰为佳,即晨起清水漱口后用力咳嗽,以获得下呼吸道来自空洞的痰。痰液量2-4ml。若咳痰极少,亦可留取24小时痰送检 。 1.2 采集方法用专用瓶收集2-4ml痰液,将标本用内径为3mm的接种环,选取标本一环,约为0.1ml,直接均匀涂在载玻片右2/3处,涂抹大小为10mm×20mm的卵圆形痰膜。剩余的标本用等量0.5%NaOH将其混匀震荡数分钟,使标本充分液化,经121℃高压灭菌20分钟,凉后将液化的痰液倒入一根试管里,3000r/min离心20分钟,弃去上清液,将沉淀全部涂到玻片上,与先前涂的片子一同干燥,固定,抗酸染色,镜检。 1.3 结果判断 按痰检质量保证手册中规定的标准判断结果。300 个油镜视野内见不到结核分枝杆菌时为-,见到1～8 条结核分枝杆菌时为±,3～9 条/100 视野为1+,1～9 条/10 视野为2+,1～9 条/ 每视野为3+,≥10 条/ 每视野为4+[1]。 2 结果分析 2.1 256例标本见表1,直接涂片法查出阳性12例,阳性率为4.69%;沉淀法涂片也为阳性,无一漏检,但其中有15例直接涂片阴性的标本,沉淀法检出结果为阳性,从而使阳性率提高到10.55%。由此可见,离心沉淀集菌涂片法的阳性率明显高于直接涂片法。 2.2 其余232例标本直接涂片法和沉淀法检查均为阴性,患者经临床检查诊断未患肺结核,诊断率高。 3讨论 3.1痰涂片抗酸染色查找结核分枝杆菌作为细菌学检测的手段之一,简便、经济、快速是其优点[2],但直接涂片时由于痰液的粘稠以及结核分枝杆菌的分布不均,再加上制片不能太厚,因此结核分枝杆菌被涂到玻片上的机会和数量都有限,容易漏检,检出率低。 3.2 高压灭菌离心沉淀法降低了工作人员感染结核病的机率。因痰液内的结核杆菌,煮沸2分钟可杀死部分结核杆菌,持续煮沸5分钟才能够杀死全部结核杆菌。用高压蒸汽灭菌方法的消毒处理,可以杀死芽孢杆菌,是结核分枝杆菌及其污染物的最安全最彻底的消毒灭菌方法。因此高压灭菌沉淀法是首先把痰内活的结核分枝杆菌经高压消毒后将结核分枝杆菌杀死,然后进行涂片检查,这样对操作者大大降低了感染机率[3.4]。而直接涂片法,痰内结核杆菌为活菌,对操作者随时都有感染的机会,容易引起交叉感染。 3.3高压灭菌离心沉淀涂法能提高检测灵敏度。在直接涂片法中将约0.1 ml痰液均匀涂成200mm2 (10 mm×20 mm) 面积的薄膜,而离心沉淀集菌法是将痰液中所含结核分枝杆菌的大部分浓缩到0.1 ml沉淀中,所以其灵敏度可大幅度提高。 通过高压灭菌离心沉淀法和直接涂片法的比较,明显看到高压灭菌离心沉淀法比直接涂片法检出率更高,对检验人员交叉感染机率更低。因此它对进一步提高肺结核病的实验室诊断水平具有重要的临床意义。 参考文献 [1]全国临床检验操作规程. [2]刘志辉,罗鲁.结核病实验室诊断现状及展望[J].中国防痨杂志,2003,25(3):38. [3]邱青莲,宋荣耀. 枣庄市1993～2001年耐药肺结核病流行病学调查[J]. 中国全科医学,2002,5(8):641. [4]赵勇. 老年人单纯支气管内膜结核47例临床及误诊分析[J]. 中国综合临床,2004,20 (12):1144. 1