痹痛方镇痛抗炎作用探究.doc

痹痛方镇痛抗炎作用探究摘要：目的：观察痹痛方镇痛抗炎方面药效学作用，探讨其治疗类风湿性关节炎的药理学基础。方法：镇痛实验用热板法与扭体法；抗炎实验采用毛细血管通透性实验、棉球肉芽肿实验及佐剂性关节炎模型；观察药物对内毒素引起的TNF-α产生的影响。结果：在热板法与扭体法实验中痹痛方能明显提高小鼠痛阈；具有抑制毛细血管通透性、减轻棉球肉芽肿质量；显著抑制大鼠佐剂性关节炎急性足爪肿胀，对继发性的足肿胀也有明显的抑制作用。并能明显减少内毒素引起的TNF-α产生。结论：痹痛方具有明显镇痛抗炎作用。镇痛作用机制可能通过外周与中枢两种机制介导；而免疫调节作用可能为其抗风湿炎症的机制之一。? 关键词：痹痛方；类风湿性关节炎；镇痛；抗炎；肿瘤环死因子? 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2007）04-0788-03 痹痛方多年来在临床主要用于治疗类风湿性关节炎，具有一定的临床疗效。主要由全蝎、蜈蚣、制附子、川芎、延胡索、芍药、丹皮等组成，具有搜风通络、行气止痛等功效。本试验利用弗氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎（Adjuvant Arthritis, AA）等模型，从动物实验角度对痹痛方的镇痛抗炎作用进行药效学评价。? 1材料与方法? 1.1实验动物与试剂NIH小鼠，普通级，BW（20±1）g，雌雄兼用；SD大鼠，普通级，BW（200±5）g，雄性，均由广东省医学实验动物中心提供。盐酸布洛芬（ibuprofen中美史克）、醋酸泼尼松片(prednisone，仙居制药)，弗氏完全佐剂（GIBCOBRL）。脂多糖(lipololysaccharide,LPS,from Escherichia coli0111:B4 Sigma)。TNF-α ELISA测试盒（RND）。痹痛方为院内制剂，由中药饮片水提浓缩而成，实验中用蒸溜水配成所需浓度。小剂量每mL含0.3g生药，大剂量每mL含0.6g生药。本研究中小鼠实验给药20mL/kg体重、大鼠给药10mL/kg体重。? 1.2小鼠热板实验[1]NIH小鼠置于（55±0.5）℃的水浴烧杯上，以舔后足所需时间为痛阈(s)，各组动物均测两次给药前的正常阈值，取平均值为基线，剔除基线阈值在30s以上、阈值10s以内以及跳跃的小鼠。然后分组给药。对照组给等容积蒸馏水，小剂量组给0.3g/mL痹痛方20mL/kg；大剂量组给0.6g/mL痹痛方20mL/kg，西药组灌胃给盐酸布诺芬0.0105g/kg，给药后30、60、90、120min分别测各组小鼠的痛阈，如小鼠在热板上60s仍无痛反应，取出按60s计。? 1.3小鼠扭体实验[2] NIH小鼠分别给等容积蒸馏水、小剂量中药、大剂量中药及盐酸布诺芬（0.0105 g/kg），给药后0.5 h，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.2mL，观察注射后20min内各鼠的扭体反应次数。? 1.4小鼠腹腔毛细血管通透性实验[3]NIH小鼠同上给药0.5h后尾静脉注射0.5%伊文斯蓝生理盐水溶液10mL/kg BW，随即腹腔注射0.6%醋酸10mL/kgBW，20min后脱颈椎处死，剪开腹部皮肤肌肉，用6mL生理盐水分数次洗涤腹腔，吸管吸出洗涤液、合并后加入生理盐水至10mL，3000r/min离心15min；取上清液于590nm比色测定OD值。? 1.5大鼠棉球肉芽肿实验[3]SD大鼠雄性，乙醚麻醉左侧腹股沟皮下切口，植入灭菌棉球30mg，分组连续给药7天（对照组每天给予等容积水，小剂量组给0.3g/mL痹痛方10mL/kg，大剂量组给0.6g/mL痹痛方10mL/kg，西药组给醋酸泼尼松片0.005g/kg），8天颈椎脱臼处死，取出棉球在60℃烘箱放置12h称重，减去原棉球重量即为肉芽肿净重。? 1.6佐剂关节炎实验[4]SD大鼠，测左、右足容积，取均值作为给药前容积，右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL，对照组不注射佐剂。每天各组动物给予相应受试药物，对照组与模型组每天给予等容积水，小剂量组给0.3g/mL痹痛方10mL/kg，大剂量组给0.6g/mL痹痛方10mL/kg，西药组给醋酸泼尼松片0.005g/kg。动物每天给药1次，连续30天。给予佐剂后2、5、10、15、20、25、30天测右足容积1次，并于第10天起加测左足容积。足肿胀度计算方法：肿胀度（%）=（致炎后足容积-致炎前足容积）/致炎前足容积。? 1.7内毒素诱导佐剂关节炎大鼠TNF-α产生[5]上述佐剂关节炎实验第30天，每只大鼠给予腹腔注射100μg/kg脂多糖(lipololysaccharide, LPS, from Escherichia coli0111:B4，生理盐水配制)，3