益肾活血方剂对糖尿病大鼠肾组织胰腺组织氧化应激抑制作用实验探究.docVIP

益肾活血方剂对糖尿病大鼠肾组织胰腺组织氧化应激抑制作用实验探究(辽宁中医药大学职业技术学院生物制剂教研室，辽宁沈阳110101) 摘要：目的：探讨益肾活血方剂对糖尿病大鼠肾组织、胰腺组织氧化应激的抑制作用。方法：将SD大鼠分为4组：正常对照组(A组)、低剂量组(B组)、高剂量组(C组)、糖尿病组(D组)。B、C、D3组制成糖尿病模型，B纽予以中药益肾活血方剂18g/kg，C组予以26g/kg。用药6周后，断头处死动物，立即取左肾和胰腺用生理盐水制成10％的组织匀浆，测定肾组织、胰腺组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)活力和超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果：糖尿病大鼠MDA含量明显增高，GSH-Px、SOD活力明显降低，此益肾活血方剂能够增高肾组织GSH－Px、SOD活力和胰腺组织的GSH－Px活力。结论：此方剂通过增高肾组织GSH－PxSOD活力和胰腺组织的GSH－Px活力起到抗氧化的作用，从而起到保护肾功能的作用。 关键词：糖尿病肾病；益肾活血方剂；氧化应激 中图分类号：R－33　文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05-0952-02 糖尿病(DM)患者约有30％经过若干年后将发展为糖尿病肾病(DN)，DN是终末期肾病的重要因素之一。DN早期经过干预是可以逆转的。本实验依据中医的糖尿病病机的理论，应用益肾活血方剂治疗糖尿病大鼠，通过测定糖尿病大鼠肾组织、胰腺组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)活力和超氧化物歧化酶(SOD)的活力来阐述此中药的作用机理。 1材料与方法 1.1益肾活血方剂的制备 由生地、生黄芪、山药、山茱萸、女贞子、云茯苓、泽泻、姜半夏、丹参、益母草、川芎、制大黄组成，由本院药学系中药制剂教研室经严格的中药鉴定后按国家标准的制剂工艺制成汤剂。汤剂的总浓度为2g/mL。 1.2糖尿病大鼠模型的建立和分组 取体重为200～250g SD雄性大鼠50只，其中8只为正常对照组，42只经腹腔注射链脲佐菌素(溶解在pH4.0,O.1mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液中)50mg/kg,48h后取尾血测血糖，血糖≥16.7mmol/L为糖尿病。其中35只造模成功，其余7只未致糖尿病，从实验中去除。将动物分为4组：正常对照组(未注射链脲佐菌素)8只(A组)；低剂量组(按18g/kg给汤剂)12只(B组)；高剂量组(按26g/kg给汤剂)12只(C组)；糖尿病组，11只(D组)。 1.3试剂与主要仪器　链脲佐菌素(STZ)购自美国Sigma公司，GSH－Px、SOD、MDA测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。UV－2100－分光光度计为龙尼柯上海仪器有限公司产品。 1.4实验方法　建模成功后，低剂量组、高剂量组灌胃给药，正常对照组、糖尿病组灌胃给等量的水。经过6周实验，断头处死动物，立即取左肾和胰腺用生理盐水制成10％的组织匀浆，用于指标的测定。 1.5统计学处理　实验数据以x±s表示，用SPSS统计软件，组间数据用t检验分析。 糖尿病组、低剂量组、高剂量组血糖明显高于正常组。糖尿病组和高剂量组的尿素氮明显高于正常组，低剂量组的尿素氮明显低于糖尿病组。 肾组织和胰腺组织糖尿病组、低剂量组、高剂量组的MDA含量明显高于正常对照组。各组与糖尿病组比较差异无显著性，低剂量组、高剂量组之间差异无显著性。 肾组织GSH－Px活力低剂量组、高剂量组与正常对照组比较无统计学意义，正常组、低剂量组、高剂量组与糖尿病组比较差异有显著性。胰腺组织低剂量组和糖尿病组与正常对照组比较差异有显著性，高剂量组与糖尿病组比较差异有显著性，低剂量组与高剂量组比较差异有显著性。 肾组织SOD活力低剂量组、高剂量组、糖尿病组与正常对照组比较差异非常显著，低剂量组、高剂量组与糖尿病组比较差异有显著性。胰腺组织正常对照组与糖尿病组比较差异显著。低剂量组、高剂量组与糖尿病组比较差异无显著性，与正常对照组比较差异也无显著性。 3讨论 糖尿病肾病(DN)是糖尿病主要的慢性并发症之一。其发病机制复杂，其中糖尿病持续高糖状态下，氧自由基生成增多在DN发生、发展中起重要的作用。中医界认为DN病因病机是随病程的发展而不断演变，早期为脾肾两虚，精微不固，痰瘀互阻，治疗原则为补益脾肾，固精，化瘀活血。此益肾活血方剂中生地、山茱萸、山药益肾健脾；茯苓、泽泻、姜半夏健脾化湿祛痰；黄芪、女贞子益气养阴；丹参、益母草、川芎、大黄活血化瘀通络。此方剂肝肾脾并补，通过培补先天，益气养阴，活血化瘀，利水消肿达到有效防止糖尿病肾病的发展。 近年来的研究发现，高糖状态下，葡萄糖自身氧化，蛋白质的非酶糖化，多元醇通路的激活和转铁离子的释放