缺血再灌注损伤及细胞凋亡及相关基因Bcl-2.docVIP

缺血再灌注损伤及细胞凋亡及相关基因Bcl-2缺血再灌注损伤是各种器官及组织移植过程中导致早期失去功能的最主要原因。近年来，越来越多的研究证实，细胞凋亡是造成移植物缺血再灌注损伤早期细胞死亡的主要方式。现将缺血再灌注损伤时细胞凋亡及相关基因B-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)以及其调控机制的相关研究进展综述如下。 1细胞凋亡的概念 细胞凋亡（Apoptosis），又称细胞程序性死亡(Programmed Cell Death,PCD)，是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程，是细胞生命周期中的重要组成部分。这一概念是1972年由澳大利亚组织病理学家 Kerr[1]首先提出，Apoptosis一词本意是花瓣或树叶从花或树上掉落或凋落，而Kerr借用它来形象地描述一种特殊类型的细胞死亡即凋亡。它是一种具有独特的形态学和生化改变的、与坏死截然不同的另一种死亡方式；是一个主动的高度有序的经基因严密调控的一系列酶参与的过程，可见于胚胎发育、组织发生、组织分化及细胞癌变等过程[2］。 2细胞凋亡的特点 细胞凋亡描述的是单个细胞的死亡，其典型的形态学改变是[3]：细胞体积缩小、胞质凝缩，内质网疏松并与胞膜融合；核糖体等聚集，但无结构破坏，染色质固缩，密度增高并集聚于核膜周边，嗜碱性增强，核仁裂解，继而细胞膜出泡、内陷，将细胞自行分割成多个具有膜包裹的凋亡小体（apoptosis body）。凋亡小体最后被巨噬细胞或临近吞噬细胞吞噬，或排入体腔如腺腔及血管腔等[4]。整个过程无细胞质的外泄，故不引起炎症反应及周围组织的次级损伤。而细胞坏死是细胞死亡的另一种方式，其特点与细胞凋亡不同，主要表现为膜通透性增加，细胞外形不规则变化；内质网扩张，核染色质位移，细胞器和核肿胀，溶酶体破坏，细胞膜破裂，胞浆外溢，坏死细胞被巨噬细胞所吞噬，引起周围组织不同程度炎症反应。因此细胞坏死一般是成片发生的，在形态上易与细胞凋亡相区别。 细胞凋亡的生化特征主要是细胞内发生一系列信号传递反应，以染色体脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid,DNA）被激活的核酸内切酶有控降解为突出特征。基因组DNA发生有规律的不可逆性降解，核小体之间的连接部双螺旋DNA被特异性钙离子/镁离子（Ca2＋/Mg2＋）依赖的DNA内切酶断裂成含180～200 个碱基对（base pair,bp）的多倍寡核小体片段，在琼脂糖凝胶电泳上呈典型的梯状(ladder)条带。利用这一特点，可以检测凋亡细胞的存在 ［5-6］。 3缺血再灌注（ischemia-reperfusion,I/R）损伤时的细胞凋亡现象 既往普遍认为组织I/R损伤后最终必将引起细胞死亡，即坏死，但近年来的研究表明，细胞凋亡是在I/R损伤早期的细胞死亡形式，且在I/R损伤的病理过程中起着重要的作用。 3.1 肝脏I/R损伤与细胞凋亡：Borghi等[7]观察了16例临床原位肝移植术后细胞凋亡情况,整个切片肝细胞凋亡指数为18.7%，肝被膜下区为30.4%，小叶中央区为14.5%，门静脉周围区10.3%。并指出，肝细胞凋亡指数与冷缺血时间无关，而与术后天门冬氨酞转氨酶水平呈正相关，与血清V因子水平呈负相关。故认为，肝移植术后出现较多的细胞凋亡可能与肝脏I/R损伤有关。Gao等[8]研究发现单纯冷保存肝16h，未发现凋亡细胞，而保存8h及16h后分别予以含氧再灌注1h则肝窦内皮细胞的凋亡细胞数显著增加，故认为肝窦内皮细胞凋亡是肝移植I/R损伤造成移植肝失去功能的主要原因。张浩等[9]研究表明大鼠冷灌注保存及再灌注后肝脏均有肝细胞凋亡发生，且呈阶段性。在冷灌注保存肝组织中可检测到bax及Fas，未检测到Bcl-2，肝移植再灌注后肝组织中可检测到bax、Fas及Bcl-2。Rentsch等[10]研究也证实随着冷灌注保存及再灌注时间的延长大鼠移植肝细胞凋亡数显著增加，而且bax表达增强，而天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3(MACH/FLICE)表达降低。 3.2 脑I/R损伤与细胞凋亡：Li等[11]在大鼠局灶性脑缺血模型中，采用凋亡细胞原位末端标记―TUNEL（TDT-mediat dTUP nick end labeling）法观察了缺血10～20min再灌流48h后细胞凋亡发生的情况，结果表明，人脑中动脉阻断90～120min后再灌流48h，凋亡细胞大量出现在梗塞灶的内边缘区。MacManus等[12]在大鼠全脑缺血模型中发现，12min缺血后，纹状体和海马分别于缺血第1、2天出现梯形DNA电泳条带，并且随时间的延长，出现以单体(200 bp)