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聚合度为6～8壳寡糖制备
聚合度为6～8壳寡糖制备摘要：目的研究聚合度6～8的壳寡糖的制备工艺。方法选用合适的酶降解壳聚糖，超滤、干燥；用TLC、HPLC、MALDI-TOF-MS检测产品。结果产品为白色，主要为聚合度6～8的壳寡糖。结论此工艺能用于制备聚合度主要为6～8的壳寡糖。
关键词：壳寡糖；聚合度；制备；基体辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法
中图分类号：Q53文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)03-0014-03
Preparation of Chitooligosaccharides with Degree of Polymerization of 6 to 8
CHEN Mian, ZHU Xi-qiang*, Li Zhi-ming, GUO Xue-ping
(Institute of Biopharmaceuticals of Shandong Province, Jinan 250108, China)
Abstract：Objective To study the preparation technology of chitooligosaccharides with degree of polymerization of 6~8. Methods Chitosan was hydrolyzed by special enzymes, then the hydrolysis product was successively ultrafiltered, dried and examined with TLC, HPLC and MALDI-TOF-MS. Results The product was white powder and mainly contains chitooligosaccharides with degree of polymerization of 6~8. Conclusion This method can be used for the preparation of chitooligosaccharides with degree of polymerization of 6~8.
Key words：chitooligosaccharide; degree of polymerization; preparation; matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS)
壳寡糖是由β-1,4-糖苷键连接的2-氨基葡萄糖组成的聚合度为2～20的寡糖，其中部分糖残基的氨基上会带有乙酰基，这是由原料壳聚糖的不完全脱乙酰基带来的。壳寡糖，特别是聚合度为6～8的壳寡糖具有良好的抗菌、增强免疫力、抗肿瘤活性，引起广泛关注[1-3]。一般通过化学法、物理法和酶法降解壳聚糖从而制备壳寡糖[4]。但壳寡糖产品由于自身含有氨基和羰基，易发生羰氨缩合而褐变。本实验旨在研究聚合度6～8的壳寡糖的稳定、简便的生产工艺。
1材料和方法
1.1材料
氨基葡萄糖盐酸盐（Sigma公司）；水解粗酶（厂家赠送）；壳聚糖、壳寡糖样品A和壳寡糖样品B（厂家提供）；茚三酮（上海三爱思试剂有限公司）；其他试剂为分析纯。
1.2仪器
Waters高效液相色谱仪；ABI4700基体辅助激光解吸附电离-飞行时间质谱仪。
1.3方法
1.3.1酶解壳聚糖取壳聚糖溶于稀酸溶液，调pH 6～7加入水解粗酶搅拌混匀，30 ℃水浴保温24 h，过滤取清液，超滤并干燥[5]，得到自制壳寡糖Ⅰ；另取壳聚糖经上述酶解等步骤，但在干燥前纯化，得到自制壳寡糖Ⅱ。
1.3.2壳寡糖水溶性比较精密称取壳寡糖样品（简称样品）A、B和自制壳寡糖（简称自制）Ⅰ各100 mg，室温下分别加入1 mL 蒸馏水混匀，观察溶解情况；30 min后12 000r/min离心3 min，弃上清，沉淀置65 ℃烘箱干燥后称重，计算沉淀物占投入重量的百分比。
1.3.3壳寡糖的TLC分析取各样品的澄清溶液，在硅胶板上点样并展开，展开剂为正丁醇∶氨水=3∶1，茚三酮显色[6]。
1.3.4壳寡糖的HPLC分析取样品适量，Waters糖柱分析，流动相为乙腈∶水=50∶50（含3 ‰氨水），流速为1mL/min[7]。
1.3.5壳寡糖的质谱分析取样品适量进行质谱分析，离子源（200 Hz），反射式检测正离子[8]。
2结果
2.1壳寡糖外观及水溶性
制备得到白色粉末状壳寡糖，见图1。
样品A和B溶于水呈黄褐色
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