脾阴虚痴呆证病结合模型建立及滋补脾阴方药干预实验探究.docVIP

脾阴虚痴呆证病结合模型建立及滋补脾阴方药干预实验探究摘要：目的：为有效模拟临床，建立脾阴虚痴呆证病结合大鼠模型。并观察滋补脾阴(zi－Bu－Pi－Yin，ZBPY)方药对其影响。方法：采用经典方法建立脾阴虚模型，随后将凝集态p－淀粉样蛋白1－40(B―Amyloid l－40，AB.40)定位注射到双侧海马，应用ZBPY方药干预，观察各组体征变化。通过跳台仪和Morris水迷宫进行行为学测试，比较各组学习记忆能力的改变。结果：脾阴虚组和脾阴虚痴呆组表现出饮水量增加(.PO.01)，肛温升高(P0.01)等阴虚内热征象；痴呆组和脾阴虚痴呆组学习记忆力降低(PO.05)；脾阴虚痴呆+ZBPY组阴虚表现和学习记忆力均有所改善(P0.05)。结论：本研究在完善阿尔茨海默病的证病结合模型方面作了尝试，观察了证、病、证病结合模型在体征和行为学方面的变化；ZBPY方药对脾阴虚痴呆大鼠的阴虚表现及学习记忆能力均有一定改善作用。 关键词：阿尔茨海默病；脾阴虚；滋补脾阴；学习记忆 中图分类号：R－33　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01－0009－04 阿尔茨海默病(Alzheimers disease，AD)是老年人最常见的一种神经退行性疾病，以严重的记忆力减退和认知功能障碍为主要临床表现。为有效模拟临床，客观评价滋补脾阴(ZBPY)方药的治疗效果，本研究建立脾阴虚痴呆证病结合大鼠模型，予以ZBPY方药干预，观察其对模型的干预效果。 1　材料 1.1　动物 SPF级雄性SD大鼠35只，体重(200±20)g，鼠龄6―8周，购自上海西普尔一必凯实验动物有限公司，许可证号：SCXK(沪)2003－0002。 1.2　试剂和药物 B－淀粉样蛋白l 40(B―Amyloid l－40，ABI－40)购自美国Signm公司。伤阴药(吴茱萸、附子、肉桂)和ZBPY方药(人参、山药、白芍、扁豆、茯神、檀香等)均一次性购自大连美罗医药公司，常规水煎，过滤后4℃冰箱保存备用。 1.3　主要仪器 MC－106B电子体温计为日本OMRON公司制造；Model 5000 Micro　injectlon Unit脑立体定位仪购自美国KO－PF公司；OTr－2跳台仪、DMS－2 Morris水迷宫测试与记录系统由中国医学科学院药物研究所研制。 2　方法 2.1　动物分组 将大鼠适应性喂养5天后，随机分为空白对照组、痴呆组、脾阴虚组、脾阴虚痴呆组和脾阴虚痴呆+ZBPY组，共5组(n=7)。 2.2　模型建立 脾阴虚证模型的建立参照经典的复合因素造模法，分为脾气虚和脾阴虚两个阶段。实验第1－15天为脾气虚阶段，模型组单日自由游泳达到耐力极限，禁食饲料，喂食甘蓝(30g／只)；双日予猪油脂每只1.5 mL／100g体重灌服。其余组正常喂养。予等量生理盐水灌服。第16－24天为脾阴虚阶段，在脾气虚的基础上每日增加伤阴药每只lmL／100g体重，连续灌服。其余组予等体积生理盐水灌服。参照文献[1]将符合脾阴虚标准的模型大鼠进行痴呆模型的建立。用MilliQ水将Ap－40稀释成5p,g／uL，37℃孵育1周，使其变为聚集状态备用。实验第25天，大鼠经腹腔注射2％戊巴比妥钠(45mg/kg)麻醉后，固定到脑立体定位仪，常规备皮消毒，切开皮肤；选择双侧海马为注射靶区，定位坐标参照Paxinos and Watson大鼠脑立体定位图谱，取前囟后3.5mm，中线旁2.0mm，门齿钩平面低于耳间线平面3.3mm处钻开颅骨，暴露硬脑膜。微量注射器自脑表面缓慢垂直进针至硬脑膜下2.7mm。痴呆各组每侧予以2ulAB－40溶液缓慢注入，留针5min以保证溶液充分弥散，缓慢撤针，缝合切口，皮下注射抗生素防止感染；其余组注入等体积MIIUQ水。术后继续喂养，1周后进行行为学测试。 2.3　脾阴虚证的观察指标 每天观察大鼠的活动状态、背毛色泽变化、粪便性状；每天上午定时称体重、测量肛温；各组分笼喂养，统计每只大鼠平均饮水量和食量。 2.4　药物干预 白海马微量注射术后至行为学检测完毕，脾阴虚痴呆+ZBPY组给予ZBPY方药14g,／kg，每日每只lmL／100g体重，灌胃。其它各组每日予生理盐水等体积量灌胃。 2.5　行为学测试及观察指标 2.5.1　跳台测试将大鼠放人箱中自由活动5rain熟悉环境，然后将箱底的金属杆通以电流，其正常反应是跳上橡胶制的平台以躲避伤害性刺激。记录大鼠首次跳到平台的时间(反应期)和5min内大鼠跳到金属杆上的次数(错误次数)，作为学习成绩。24h后重复试验，将大鼠放到平台上并同时通电，记录其第一次跳下平台的时间(潜伏期)和5m